目的：恶性胶质瘤，是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，已成为危害人类健康的重要脑部疾病。化疗是其临床综合治疗的重要手段之一，是治疗晚期恶性肿瘤以及防止复发必不可少的。然而，对于占恶性肿瘤90%以上的实体瘤，化疗尚未能取得满意的效果。且化疗药物对肿瘤细胞与正常细胞的选择性较差，对人体往往产生一定的毒副作用。因此，寻找高效、特异和低毒的抗肿瘤药物是肿瘤防治研究中的重要课题。　　Nodosin是从唇形科香茶菜属植物中提取出来的一种五环二萜类化合物，来源广泛，具有抑菌、抗炎等作用。本课题以恶性胶质瘤细胞株C6、U87和C6移植瘤模型为研究对象，研究nodosin对脑胶质瘤的抑制作用，并探讨其作用机制，为其临床抗胶质瘤的研究提供有力的实验依据和理论基础，为进一步开发新型抗胶质瘤药物扩展新视野。　　方法：采用倒置显微镜对胶质瘤细胞进行形态学观察；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生存率，乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞毒性，BrdU检测法检测细胞增殖情况；应用流式细胞仪技术研究nodosin对细胞周期的影响；采用Hoechst33342染色法、原位末端标记技术（TUNEL）法观察nodosin对细胞凋亡的影响。采用western blot方法对细胞周期相关蛋白cyclin B1和cdc2和细胞凋亡相关蛋白bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bak及相关胶质瘤细胞内信号通路的蛋白水平进行检测；以及通过对caspase-3/7、caspase-8、caspase-9活性检测和细胞线粒体膜电位的测定（JC-1染色），来研究nodosin抑制胶质瘤细胞增殖及诱导细胞凋亡的机制。同时，应用GSK3β抑制剂LiCl联合nodosin，研究nodosin对细胞凋亡的影响。选择划痕实验和Transwell细胞迁移、侵袭实验评价nodosin对胶质瘤细胞的侵袭迁移能力；应用激光共聚焦扫描显微镜对胶质瘤细胞骨架进行观察，并通过western blot方法检测MMP-9的蛋白含量来研究nodosi n对胶质瘤细胞的迁移与侵袭的机理。通过建立大鼠恶性胶质瘤细胞株 C6细胞皮下移植瘤模型，探讨在在体条件下nodosin对肿瘤体积、肿瘤重量等的影响，并通过HE染色观察肿瘤病理组织学的改变。　　成果：MTT结果显示nodosin对胶质瘤细胞的生长有明显的抑制作用，且呈现明显的量效、时效关系，处理细胞24h后，对大鼠胶质瘤C6细胞和人胶质瘤U87细胞的IC50分别为：25.81μM、11.05μM；而nodosin在24h时对人正常胶质细胞HEB及大鼠原代胶质细胞的存活率影响不大，其IC50分别为：32.06μM、46.69μM。LDH检测发现，nodosin对C6及U87没有细胞毒作用。这些结果表明，nodosin的抗肿瘤作用具有较强的细胞选择性，其抗肿瘤作用机制可能与细胞周期阻滞、细胞凋亡诱导和侵袭转移抑制有关。　　BrdU检测法和流式细胞术检测结果显示，nodosin对C6及U87胶质瘤细胞具有较好的增殖抑制作用，通过使胶质瘤细胞阻滞于G2/M期的机制，抑制胶质瘤细胞进入下一增殖周期，从而抑制胶质瘤细胞增殖。Western blot法实验显示，5μM、10μM、15μM的nodosin处理C6、U87细胞24h后，cyclinB1和cdc2蛋白表达水平下调。　　细胞形态学观察、Hoechst33342染色法染色以及原位末端标记技术（TUNEL）检测结果显示，nodosin能诱导胶质瘤细胞的凋亡，作用胶质瘤细胞24h后，细胞形态发生改变，细胞数量与密度减少，随着剂量增加，培养基中悬浮的死亡细胞增多，出现染色质边集，细胞核碎片化，凋亡小体形成。Caspase活性检测发现，nodosin能够增加C6、U87细胞中caspase-3/7、caspase-8、caspase-9的活性，并成一定的剂量依赖关系，提示着我们，nodosin诱导胶质瘤细胞凋亡的作用，既通过死亡受体通路，亦通过线粒体通路。Western blot法结果显示，nodosin能够下调Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达水平，上调Bak蛋白的表达水平，Bax蛋白水平不变；同时，能抑制P38 MAPK、PI3K/Akt和PKC信号通路；应用GSK3β抑制剂LiCl联合nodosin，发现 LiCl可阻断nodosin引起的细胞凋亡。　　划痕实验和 Transwell细胞迁移、侵袭实验结果显示，nodosin能够剂量依赖性地阻止胶质瘤细胞的迁移与侵袭；cofoca l结果发现，nodosi n可抑制微管聚集；western blot分析结果显示，5、10和15μM的nodosin能以剂量依赖方式减少MMP-9蛋白表达水平。提示，nodosin对胶质瘤细胞的迁移侵袭抑制机制与其促进细胞微管解聚以及下调MMP-9蛋白表达水平相关。　　接种胶质瘤C6细胞后第3d，对照组和nodosi n组的肿瘤生长没有明显差异。接种后第4d到第12d，对照组的肿瘤生长快速，nodosin组的肿瘤生长缓慢，差异有显著性意义（P<0.05)；裸鼠肿瘤重量、肿瘤体积增长率均明显小于对照组。HE染色显示，对照组C6胶质瘤细胞丰富密集，坏死很少，nodosin组C6胶质瘤细胞生长密度低于对照组，并可见到细胞体积变小，核固缩深染的凋亡形态学改变，部分区域出现液化坏死。　　结论：　　(1)首次在胶质瘤细胞模型上研究 nodosin抗恶性胶质瘤的作用，发现 nodosin对胶质瘤细胞的生长具有明显的选择性抑制作用；　　（2）Nodosin对胶质瘤细胞具有细胞增殖抑制作用，这种作用通过阻滞细胞周期于G2/M期以及下调cyclinB1和cdc2蛋白水平来实现；　　（3）Nodos in具有诱导胶质瘤细胞凋亡的作用，其机制为：nodosin通过增加Caspase-3/7、Caspase-8、Caspase-9活性、降低线粒体膜电位、下调Bcl-2、Bcl-xL蛋白的表达水平以及上调Bak蛋白的表达水平来诱导胶质瘤细胞凋亡；nodosin能抑制P38 MAPK、Akt和PKC等相关胶质瘤细胞内信号通路的蛋白水平；GSK3β在nodosin诱导细胞凋亡中是必需的。　　（4）Nodosin能通过促进细胞微管解聚以及下调MMP-9蛋白水平来抑制胶质瘤细胞的迁移侵袭。　　（5）首次在体内实验中，发现nodosin能抑制裸鼠内胶质瘤的肿瘤生长及减少肿瘤重量，具有体内抗恶性胶质瘤作用。