1．研究背景消化性溃疡的特点是易容复发，而且难于防止。临床观察表明，非甾体抗炎药（NSAIDs）是引起复发的重要因素，阿司匹林（Aspirin，Asp）是NSAIDs药的代表药。由于Asp的药理作用非常广泛，使得Asp成为全球范围内消耗量最多的药物之一。但Asp在治疗疾病的同时，产生了严重的副作用，即能引起胃炎、胃溃疡和溃疡复发等。治疗消化性溃疡的关键在于防止复发，但消化性溃疡复发的机理还不清楚，因而很难防止复发。因此，阐明消化性溃疡复发的机理，将能有效地预防溃疡复发，指导临床合理应用NSAIDs。本论文采用乙酸溃疡模型，在溃疡愈合后用Asp诱导复发，通过检测关键细胞因子和生理生化指标并进行分析，探讨了Asp引起溃疡复发的作用和复发的机制，这对防止溃疡复发、彻底治愈溃疡具有重要意义。2．材料与方法2．1．模型复制：实验采用Wistar雄性大鼠，按文献报道的方法复制胃溃疡模型。2．2．实验分组：实验分为两步，第一步是在溃疡制作后的第3、15、25天用乙醚麻醉处死部分大鼠，观察溃疡形态。第二步是在第25天观察溃疡形态后，将其余的大鼠随机分为禁食对照组、盐水对照组（灌胃法给予生理盐水）、阿司匹林组（灌胃法给予Asp）。在溃疡制作后的第55天，采集标本，进行分析。2．3．溃疡形态观察：测量溃疡面积后，对溃疡进行大体和光镜下观察。2．4．溃疡愈合质量评价：光镜下测定扩张腺体数、再生黏膜厚度、黏膜下组织中的微血管和炎细胞数量。2．5．胃黏膜PGE₂和胃酸分泌：测量胃液量和胃液的pH，ELISA方法测定PGE₂。2．6．环加氧酶表达：RT-PCR检测胃黏膜COX-1（环加氧酶-1）、COX-2 mRNA的表达；Westernblot方法检测胃黏膜COX-1、COX-2蛋白的表达。2．7．胃黏液、胃黏膜血流（GMBF）和内皮素（ET）测定：按文献报道的方法测定胃黏液，氢气清除法测定GMBF，ELISA方法测定血浆中的ET含量。2．8．生长因子：ELISA方法测定胃粘膜表皮生长因子（EGF）、转化生长因子-α（TGF-α）和血清血管内皮生长因子（VEGF）。2．9．炎症因子：ELISA方法测定血清中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和血浆中的白细胞介素-1β（IL-1β）。2．10．统计学分析：所得数据用均数±标准差表示，用SPSS11.0统计分析软件进行分析。组间差异采用单因素方差分析中的LSD法。方差不齐时用秩和检验中的Mann-Whitney U方法。P＜0.05差异显著。3．实验结果3．1．Asp对溃疡形态的影响：溃疡制作后第25天，溃疡完全愈合。在阿司匹林组，在第45天，8只大鼠中的2只出现复发，在55天，8只中的5只出现复发。3．2．Asp对溃疡愈合质量的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，囊样扩张腺体和炎细胞数多于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）；再生黏膜厚度和微血管数低于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）。3．3．Asp对PGE₂和胃酸分泌的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，PGE₂少于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）；胃液量多于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）；胃液的pH低于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）。3．4．Asp对环加氧酶表达的影响：在溃疡制作后第55天，COX-1 mRNA和蛋白的表达在3组间没有差异，与第15天的基本相同；在阿司匹林组，COX-2 mRNA和蛋白的表达多于禁食对照组和盐水对照组，与第15天的基本相同。3．5．Asp对胃黏液、GMBF和ET的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，胃黏液和GMBF少于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）；血浆ET高于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）。3．6．Asp对生长因子的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，胃黏膜EGF和：TGF-α低于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）；血清中VEGF低于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）。3．7．Asp对炎症因子的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，血清中TNF-α和血浆中IL-1β高于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）。4．讨论在溃疡制作后的第25天溃疡全部愈合。第25天以后，给予大鼠Asp，发现在第55天，8只大鼠中的5只出现复发，具有统计学意义，表明用Asp诱导复发是成功的。4．1．Asp对溃疡形态学的影响：在模型复制后的第3天，出现一个大而圆的溃疡，第25天，肉眼及镜下观察溃疡全部愈合。第55天，在阿司匹林组，肉眼及镜下观察在涂乙酸的部位出现了复发溃疡。这些结果表明，在愈合的溃疡部位，Asp引起了复发。4．2．Asp对愈合质量的影响：在模型复制后的第55天，阿司匹林组的扩张腺体数、炎细胞数高于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01）；再生黏膜的厚度、微血管数却低于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01），表明Asp能够降低溃疡的愈合质量。而阿司匹林组（8只中的3只）没有复发溃疡部位的黏膜结构与正常黏膜相似，表明愈合质量好的胃黏膜可以有效地抵抗Asp的损伤作用。这可以解释为什么复发在不同时间出现，并且多出现在原来的部位。4．3．Asp对胃黏膜PGE₂和胃酸分泌的影响：PGE₂能够抑制胃酸分泌，调节胃粘液和碳酸氢盐的分泌、扩张血管、增加GMBF、促进胃粘膜上皮细胞更新、增殖。本研究显示，阿司匹林组的PGE₂含量低于禁食对照组和盐水对照组，表明Asp能够抑制PGE₂的产生。胃酸过多可以损伤黏液-碳酸氢盐屏障和粘膜屏障。本研究还显示，阿司匹林组的胃液量高于禁食对照组和盐水对照组，而胃液的pH却低于禁食对照组和盐水对照组，表明Asp能够增加胃酸分泌，由此可知Asp抑制了PGE₂的产生，导致胃酸分泌增加。4．4．Asp对COX表达的影响：COX是前列腺素合成的限速酶。本研究显示，COX-2的mRNA和蛋白在溃疡和复发时大量表达，PGE₂理应增多，但在本研究中显示PGE₂在阿司匹林组减少，因此，阿司匹林能够抑制COX的活性而不抑制其表达。4．5．Asp对胃黏液、GMBF和ET的影响：胃黏液和HCO₃^-构成了黏液-碳酸氢盐屏障，是防御有害因子的第一道防线。GMBF可以为黏膜细胞提供氧和营养物质，维持黏液-碳酸氢盐屏障和粘膜屏障的功能。粘膜屏障是防御有害因子的第二道防线。ET具有强烈的缩血管作用。本研究显示阿司匹林组的胃黏液和GMBF都低于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01），而ET高于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01），表明Asp能够减少胃黏液和GMBF，增加ET。GMBF的减少可能是PGE₂减少和ET增加的结果。GMBF减少会导致胃粘膜缺血，引起粘液和碳酸氢盐减少，胃粘膜屏障功能减弱，溃疡复发。4．6．Asp对生长因子的影响：EGF具有抑制胃酸分泌、促进胃黏膜上皮分化、增殖和增加GMBF的作用。本研究显示，阿司匹林组的EGF低于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01），因此，Asp引起胃黏膜EGF减少，导致了胃酸分泌增多、GMBF减少，愈合质量降低，进而导致复发。TGF-α在维持胃肠道粘膜更新和完整性方面有重要作用。本研究显示，阿司匹林组的丁GF-α低于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01），因此，Asp引起胃黏膜TGF-α减少，降低了黏膜的更新能力，促进了复发。VEGF能够促进血管的形成。本研究显示，阿司匹林组的VEGF低于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01），因而血管生成减少，GMBF减少，促进了溃疡的复发。4．7．Asp对炎症因子的影响：TNF-α和IL-1β是重要的致炎因子。本研究显示，阿司匹林组的了TNF-α和IL-1β高于禁食对照组和盐水对照组（P＜0.01），表明Asp能够诱导TNF-α和IL-1β的增加，促进了炎症反应，导致了复发。5．结论Asp能够诱导溃疡复发，机制是：Asp抑制COX的活性，导致PGE₂生成减少，胃酸分泌增多，GMBF减少；GMBF减少，黏液生成减少，粘膜更新能力下降；ET增多，胃血管收缩，胃粘膜缺血；EGF和TGF-α减少，引起胃酸分泌增多，粘膜更新能力下降；VEGF减少，微血管生成减少，GMBF减少；TNF-α和IL-1β增多，诱导胃粘膜炎症反应，损伤胃粘膜。因此，Asp通过上述机制降低愈合质量，诱导溃疡复发。