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FAM3B,又称作胰腺衍生因子(PANDER),是FAM3家族成员之一。之前报道的编码235个氨基酸残基的分泌型FAM3B主要在胰岛的a细胞和B细胞中表达,已有的研究提示分泌型FAM3B可能在生理情况下参与B细胞功能调节及葡萄糖稳态维持,在病理情况下参与糖尿病的发生发展。对于FAM3B与肿瘤关系的研究尚处于起步阶段。
在本课题中,我们根据NCBI Ace View数据库列出的FAM3B mRNA的多种剪切形式,通过RT-PCR检测了不同类型的FAM3B mRNA在6种结肠癌细胞系的表达,发现其中一种长度为940 bp的FAM3B mRNA在多种结肠癌细胞系表达,根据其序列预测这种mRNA能编码具有258个氨基酸残基的非分泌型蛋白,我们将其命名为FAM3B-258。之前对于FAM3B mRNA的这种剪切形式仅见于人胎盘组织。我们发现源自恶性程度高或转移灶的结肠癌细胞系表达高水平的FAM3B-258 mRNA。我们进一步通过实时定量PCR检测了FAM3B-258在37例人结直肠腺癌样本和相应癌旁组织的表达,发现27例(73%)肿瘤样本中FAM3B-258的mRNA水平显著高于癌旁组织,FAM3B-258在肿瘤组织的表达量与肿瘤的分化程度呈负相关(P<0.05)。这些结果提示FAM3B-258可能参与结直肠腺癌的发生发展。在稳定转染FAM3B-258的HCT116细胞,我们通过PCR阵列检测了参与肿瘤发生发展的系列分子的rnRNA水平,包括参与细胞周期调控、DNA损伤修复、细胞凋亡和衰老、细胞粘附、血管生成、细胞迁移及侵袭的共84种分子。与对照细胞比较,未发现这些分子的表达在FAM3B-258/HCT116细胞有显著变化。我们在显微镜下观察到过表达FAM3B-258使HCTll6细胞的形态由上皮样转变为间质细胞样。进一步的研究表明FAM3B-258/HCT116细胞的上皮细胞标志分子E-cadherin和细胞紧密连接分子(Claudin-4和JAM)表达下降、间质细胞标志分子(Fibronectin,Vimentin和SPARC)、转录因子Slug、Snail和ZEB1以及细胞骨架调节蛋白Cdc的表达升高;同时细胞的迁移和侵袭能力显著增强。相反的,在FAM3B-258/HCT116细胞通过RNA干扰技术抑制FAM3B-258表达后,上皮细胞标志分子表达升高、间质细胞标志分子表达降低、转录因子Slug表达水平下降、细胞的迁移和侵袭能力降低。通过转染Slug siRNA抑制Slug在FAM3B-258/HCT116表达后,上皮细胞标志分子表达升高、间质细胞标志分子表达降低、细胞的侵袭能力显著降低。进一步的研究发现,在内源表达高水平FAM3B-258的HCT-8细胞中转染FAM3B-258特异性siRNA抑制FAM3B-258表达,能使上皮细胞标志分子表达升高、间质细胞标志分子表达降低、Slug、Snail和ZEB1的表达及细胞侵袭能力显著降低。最后我们在结直肠癌组织标本发现Snail和FAM3B-258在肿瘤组织的表达高于癌旁组织,且两者在配对样本中mRNA的表达呈正相关。利用小鼠模型进行体内转移实验的结果发现,注射了FAM3B-258/HCT116细胞的小鼠相对于注射对照细胞的小鼠发生肺转移的机率显著提高。这些结果证实FAM3B-258能诱导结肠癌细胞发生EMT,FAM32-258可能通过诱导Slug、Snail以及Cdc42表达而促进结肠癌细胞发生EMT并增强细胞的侵袭和迁移能力、促进肿瘤转移。这些发现提示FAM3B-258可能在结直肠癌的浸润和转移中发挥重要作用,为结直肠癌转移机理和防治的研究提供了新的内容和靶标。