肺癌是一种常见的死亡率很高的恶性肿瘤。其中非小细胞肺癌(non-small celllung cancer, NSCLC)占到肺癌的80％-85％，而且其发病率和死亡率长期以来居高不下。目前，其发生的确切的分子机制尚未充分阐明，肿瘤的发生发展与细胞增殖和凋亡平衡失调，特别是凋亡的抑制密切相关。具有植物同源结构域的锌指蛋白20(PHF20)最初被认为是一个免疫抗原，在恶性胶质瘤患者中被发现，也被称为胶质瘤表达抗原2(GLEA2)。　　 目前的研究表明，作为一个新发现的转录因子，PHF20展现出了肿瘤抑制因子的活性。PHF20是一个含有多个功能域的蛋白，其第二个Tudor区域可以识别并绑定p53。这种结合阻止了由Mdm-2介导的P53的泛素化，从而稳定并促进了肿瘤抑制因子p53的活性转录。而Akt则可以磷酸化PHF20的Ser291，使PHF20从细胞核移动到细胞质，从而丧失了稳定p53的功能。　　 Bax是Bcl-2家族中主要的促凋亡蛋白，能通过控制线粒体膜的通透性调节凋亡激活物如细胞色素C的释放来影响细胞的状态。在依赖p53的细胞凋亡中，p53蛋白对Bax表达有明显促进作用。有研究证明，体外RNA干扰特异性敲除PHF20，可以使p53和及p53下游的凋亡蛋白Bax的显著下调，并且在p53缺失的细胞系中，敲除PHF20，Bax的下降也是非常显著的;上调PHF20，可以明显的抑制细胞增殖和存活。在对恶性胶质瘤的研究中，PHF20的表达与良好的预后呈正相关。　　 本实验通过检测肺癌组织中PHF20和Bax的表达情况，以及肺癌细胞系中PHF20蛋白的表达情况，分析PHF20临床意义以及PHF20与Bax可能存在的相关性。结果显示:PHF20在非小细胞肺癌中以细胞浆表达为主，并有少量的核表达。PHF20在鳞癌中表达明显高于腺癌，并且与组织学分化、TNM分期和淋巴结转移相关。正常组织的PHF20的表达明显高于配对的癌组织。而在鳞癌中，PHF20的表达和Bax呈正相关。因此我们推测，在肺癌中，PHF20的表达变化与肿瘤进展密切相关，而且与Bax之间存在着相关性，其具体机制仍需深入讨论。　　 材料与方法：　　 1、材料　　 收集135例原发性肺癌组织标本（包括鳞癌71例，腺癌64例）和30例癌旁肺组织标本，均取自中国医科大学附属第一医院2009-2011年肿瘤外科手术切除的标本，所有患者术前均未接受放、化疗。标本经10％中性甲醇固定，石蜡包埋。　　 收集25例新鲜肺癌组织及癌旁肺组织，均来自中国医科大学附属第一医院2011-2012外科手术切除标本。　　 6株肺癌癌细胞系(LK2、A549、SPC、H1299、H157、H460)，1株人支气管上皮细胞系(HBE)。　　 2、主要试剂和来源PHF20兔单克隆抗体、Bax兔单克隆抗体均购自美国Cell Signaling Technology公司。SP免疫组化试剂盒、EliVision Plus免疫组化试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。　　 3、实验方法　　 (1)细胞培养A549、SPC、LK2、HBE细胞系在含有10％胎牛血清的DMEM培养基，H1299、H460、H157细胞系在含有10％胎牛血清的1640培养基，37℃，5％C02孵箱孵育，1-2d换新鲜培养液。当细胞长满瓶底后，用0.25％胰酶消化，进行传代。　　 (2)免疫组织化学染色及结果判定组织标本经10％中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋，制成4μm连续切片。采用EliVision两步法检测PHF20(1∶50)的表达，链霉素生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法（S-P法）检测Bax(1∶200)的表达。以PBS缓冲液代替一抗为阴性对照。结果判定:细胞内呈现棕黄色小颗粒者为阳性染色，每张切片在400倍镜下观察10个视野，每个视野计数100个肿瘤细胞。根据免疫组化染色强度分为三个等级:浅黄色计为1分，棕黄色计为2分，黄褐色计为3分。根据PHF20和Bax表达百分率分为以下四个等级:≤25％为1分，26％-50％为2分，51％-75％为3分，＞75％为4分。以染色强度和阳性细胞率的分值乘积作为每一例的积分，分数≥4定为阳性表达，＜4为阴性表达。　　 (3) Western Blot在收集的细胞内加入裂解液充分裂解，低温高速离心(4℃，15000r/min，30min)，提取上清为总蛋白。上样蛋白量为80μg。电泳、转印至PVDF膜、封闭，一抗PHF20(1∶1000)、Bax(1∶1000)和β-actin(1∶200)，4℃孵育过夜，分别与各自对应的二抗(1∶1000)室温孵育2小时，ECL显色，以B-actin、Tubulin为内参，比较各条带灰度值。　　 (4)统计分析各组资料应用SPSS17.0软件进行统计分析，P＜0.05为差异有统计学意义。　　 结果：　　 1、免疫组织化学结果PHF20和Bax蛋白定位于细胞浆，癌旁肺组织中表达高于肺癌组织(P＜0.05)。两者表达随着分化程度的降低而减弱(P＜0.05)、在有淋巴转移的肺癌组织中表达显著低于无淋巴结转移的肺癌组织(P＜0.05)。另外，PHF20蛋白表达随着TNM分期上升表达减弱(P＜0.05)，并且在肺鳞癌中的表达显著高于肺腺癌(P＜0.05)。在71例鳞癌中，PHF20与Bax蛋白表达呈正相关(P＜0.05)。　　 2、Western blot结果PHF20蛋白和Bax蛋白在肺癌组织的表达量低于配对的癌旁肺组织(P＜0.05)。PHF20蛋白在正常人支气管上皮细胞系中的表达量高于在肺癌细胞系中的表达量。　　 结论：　　 非小细胞肺癌中，PHF20和Bax表达与病理分级负相关(P＜0.05)、与淋巴结转移负相关(P＜0.05)，PHF20表达还与TNM分期负相关(P＜0.05)和组织学类型相关（肺鳞癌中表达显著高于肺腺癌，P＜0.05）。在肺鳞癌中，PHF20和Bax呈正相关(P＜0.05)。