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本研究以香蕉(Musa spp.)品种“天宝蕉”(Musa spp ., AAA类群)新株系TY1和孟加拉粉大蕉(Musa spp., ABB类群)为试验材料,采用根癌农杆菌介导法对不同基因型香蕉遗传转化体系进行研究,并以天宝蕉叶片为材料进行ACS基因的克隆研究,为构建自身反义基因表达载体,进行“自体转化”奠定基础。主要研究内容包括:①香蕉离体再生体系的优化研究;②根癌农杆菌介导ACS反义基因转化香蕉研究;③筛选抗性芽和诱导植株再生、并对再生植株进行检测研究;④初代转基因试管苗的继代增殖和移栽;⑤天宝蕉叶片ACS基因保守区序列的克隆研究。主要研究结果如下:1.香蕉离体再生体系的优化研究试验以“天宝蕉”新株系TY1和孟加拉粉蕉吸芽为外植体,对离体再生进行研究,优化离体再生条件。在生长旺盛期(如4～5月)进行取材,外植体采用0.1 %升汞+3～5滴吐温(Tween-80)消毒效果最好;消毒后的外植体先经过MS液体培养基培养1-2周后,再用固体培养基培养,防止褐变效果较好;低盐培养基和附加AC、PVP和Vc组合的培养基对减轻外植体褐化的效果较好。2.根癌农杆菌介导ACS反义基因转化香蕉研究优化后的转化条件为:香蕉茎尖横切薄片,侵染前用附加0.15 mg﹒L-1甘露醇的高渗固体培养基前处理5 h,农杆菌重悬液浓度为OD6000.8-1.2左右,重悬液中含100 g﹒L-1的葡萄糖,接菌时间为10~15 min,于26℃黑暗条件下共培养4 d,共培养培养基pH值为5.6。以此条件进行了稳定转化试验。3.筛选抗性芽和诱导植株再生及其分子检测研究对转化ACS反义基因薄片进行抗性芽筛选及转基因植株再生研究,并对薄片进行GUS瞬时表达检测、再生植株叶片的GUS稳定表达检测、gus和ACS基因的PCR检测。采用附加100 mg﹒L-1卡那霉素、1 mg﹒L-1 BA、0.1 mg﹒L-1NAA的筛选培养基对共培养后的天宝蕉新株系TY1横切薄片进行筛选,共获得2个转ACS反义基因的抗性芽系,而孟加拉粉大蕉采用附加120 mg﹒L-1卡那霉素、1 mg﹒L-1 BA、0.1 mg﹒L-1NAA的筛选培养基进行筛选,未获得正常的抗性芽。经PCR检测,gus和ACS基因已整合进香蕉基因组。4.初代转基因试管苗的继代增殖和移栽初代转基因试管苗在附加4.0 mg﹒L-1 BA4.0 mg﹒L-1、0.3 mg﹒L-1 NAA的培养基经20 d培养,增殖率最高;生根瓶苗以珍珠岩为基质在春季进行移栽,成活率达到95%。5.香蕉(天宝蕉)叶片ACS基因保守序列的克隆研究利用改良CTAB法提取的总RNA完整性比较好,量也较大,所需药品简单,是提取香蕉叶片等组织总RNA行之有效的方法。利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)得到香蕉叶片中ACS基因保守序列.DNA序列分析表明,所获得香蕉的ACS cDNA序列约为569bp,编码189个氨基酸。该序列与已发表的ACS基因有很高的同源性。本研究对香蕉离体再生体系、根癌农杆菌介导ACS反义基因转化香蕉、香蕉叶片ACS基因保守序列的克隆等进行了研究,在香蕉品种改良上有重要意义,并为香蕉转基因的研究提供了技术平台。