【摘 要】
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目的原核表达P53重组蛋白,检测P53重组蛋白对人类白血病细胞系K562和人肝癌细胞系SMMC-7721体外增殖的影响。方法运用PCR技术鉴定了pET-1053重组质粒导入BL21菌株中p53基因的
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目的原核表达P53重组蛋白,检测P53重组蛋白对人类白血病细胞系K562和人肝癌细胞系SMMC-7721体外增殖的影响。方法运用PCR技术鉴定了pET-1053重组质粒导入BL21菌株中p53基因的存在,并在IPTG的诱导下,大量产生外源基因产物。通过Ni-NAT亲和层析柱纯化分离P53蛋白,SDS-PAGE确定该蛋白准确性。以不同浓度经磁性荧光纳米粒子(FMNP)修饰后的P53重组蛋白诱导K562细胞和SMMC-7721细胞,用MTT比色法、集落形成法、流式细胞术(FCM)测定P53蛋白对靶细胞增殖的影响。利用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察经磁性荧光纳米粒子修饰的P53重组蛋白在细胞中的定位。结果1.成功的构建了含人野生型p53基因的原核表达载体,分离纯化了P53重组蛋白。2.磁性荧光纳米粒子修饰的P53重组蛋白较未修饰的蛋白有更好的凋亡诱导作用,且磁性纳米粒子本身并不具细胞毒害作用;3.P53重组蛋白抑制K562肿瘤细胞的生成,随药物剂量增大,细胞凋亡率上升,其半数抑制浓度(IC50)为6.74μg/ml 4.随着P53重组蛋白浓度的增加,SMMC-7721细胞存活率显著降低,并发现该蛋白能促进肿瘤细胞凋亡,且呈现明显的剂量依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为12.39μg/ml 5.激光共聚集显微镜观察发现P53重组蛋白主要定位于细胞核,胞浆也有少量分布。结论原核表达的P53重组蛋白具有野生型P53(wtp53)蛋白活性,体外实验发现经磁性荧光纳米粒子修饰的P53重组蛋白能够抑制K562细胞和SMMC-7721细胞生长并促使它们发生凋亡。
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