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蜡梅(Chimonanthus praecox L.)为我国特有的落叶丛生花灌木,凌寒怒放,花香四溢,以“冻不死、旱不死、不缺枝”三不著称,具有较强的抗逆性。植物 MYB转录因子在抗逆生理过程中发挥了巨大的作用,而蜡梅花朵在各种逆境条件下能够旺盛生长,推测其可能有很多转录因子参与调控各种抗逆境基因的表达。 为了研究蜡梅花中抗逆性 MYB转录因子及其他抗逆相关基因的表达调控机制,本研究充分利用蜡梅花转录组文库,初步筛选获得 MYB抗逆性及其它相关的候选基因,获得全长目的基因并构建植物表达载体,转入模式植物烟草和拟南芥中,并对转基因植株进行表型观察。主要研究结果如下: 1.基于已有蜡梅转录组数据,通过生物信息学分析进行初步筛选出MYB相关的Unigene175个,bHLH相关的Unigene67个,WD40相关的Unigene60个;将三个家族的部分氨基酸分别与拟南芥的R2R3-MYB、bHLH、WD40进行聚类分析,初步预测了其功能,确定17个抗逆性相关的MYB类候选基因。 2.利用RACE等技术主要克隆了7个抗逆性MYB基因及1个抗逆相关基因,通过生物信息学分析发现有6个R2R3-MYB转录因子,1个MYB-related转录因子,1个WD40转录因子;推测它们可能具有抗寒、调控信号转导、影响花瓣表皮细胞的发育及毛状体形成和抵抗非生物胁迫等功能。 3.成功构建了6个目标基因的植物超量表达载体,采用农杆菌介导的遗传转化方法获得3个目标基因的转基因植株。其中CpMYB3转基因拟南芥4株中有1株生长缓慢,植株整体变深绿,叶片较小,长角果变短或无法发育。