肺形草抗H5N1禽流感活性成分研究

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高致病性禽流感(HPAI)给人类的健康造成巨大威胁,目前尚无特效治疗药物。从中草药中寻找高效低毒的抗HPAI的单体化合物是发现并研制抗HPAI药物的一条有效途径。本论文选择A/Tiger/Harbin/01/2002株简称(HAB/01)H5N1病毒感染犬肾细胞株(MDCK)为活性筛选模型,以细胞病变法(CPE)作为初步筛选的活性评价方法,对66种中草药进行体外抗病毒活性筛选,首次发现了7种抗H5N1病毒作用显著的中草药,其中肺形草活性最好。本论文决定对肺形草的化学成分及抗禽流感活性进行深入研究,希望发现具有抗禽流感活性的单体化合物,为抗禽流感药物的研制与开发奠定基础。本论文通过AB-8大孔树脂柱色谱、重结晶、硅胶柱色谱、C18反相柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和PHPLC等手段分离纯化,从肺形草中分离得到了50个化合物,通过理化常数的测定、MS、1D和2D NMR(1H-1H COSY、HSQC、HMBC)等波谱分析,鉴定了其中41个化合物(包括1个混合物)的结构,其中有5个新化合物,鉴定的41个化合物的结构分别为:双蝴蝶苷C(1)、双蝴蝶苷D(2)、双蝴蝶苷E(3)、双蝴蝶苷F(4)、双蝴蝶苷G(5)、双蝴蝶苷B(6)、獐芽菜苷(7)、番木鳖酸(8)、8-表-金银花苷(9)、岩白菜素(10)、异牡荆素(11)、异牡荆素-7-O-鼠李糖(12)、异荭草素-7-O-鼠李糖(13)、肥皂草苷(14)、三叶豆苷-2′′-O-鼠李糖(15)、三叶豆苷(16)、8-羟基-1,2,6-三甲氧基呫吨酮(17)、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基呫吨酮(18)、1,2,8-三羟基-5,6-二甲氧基呫吨酮(19)、1,3,7-三羟基-4-C-β-D-葡萄糖基呫吨酮(20)、大黄酚(21)、大黄素(22)、芦荟大黄素(23)、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷(24)、1,3,8-三羟基-6-羟甲基蒽醌(25)、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(26)、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷(27)、芦荟大黄素-3(-羟甲基)-O-β-D-葡萄糖苷(28)、齐墩果酸(29)、熊果酸(30)、β-胡萝卜苷(31)、咖啡酸(32)、3,4-二羟基苯甲酸(33)、2-甲氧基苯酚(34)、4-羟基苯甲酸(35)、正三十四烷酸(36)、胸腺嘧啶脱氧核苷(37)、尿嘧啶核苷(38)、β-谷甾醇(39)、豆甾醇(40)、α-L-夹竹桃糖(41a)和β-D-加拿大麻糖(41b)。化合物1至5为5个新化合物(包括2个环烯醚萜四聚体、2个环烯醚萜二聚体、1个含有糖基的β-内酯),化合物9-10、12-16、21-29、31-38、40-41共26个化合物首次从该属分离得到;化合物7-8、20、30共4个化合物首次从该植物中分离得到。从化合物结构类型看,包括环烯醚萜类化合物8个,黄酮类化合物8个,蒽醌类化合物8个,其它类化合物15个,其中化合物1和5是首次分离得到的裂环烯醚萜四聚体新化合物;化合物3是首次分离得到的含有糖基的β-内酯新化合物;化合物4是首次分离得到的裂环烯醚萜与生物碱相连接的新化合物;这些化合物丰富了天然产物的结构类型。对于已知化合物,本论文首次报道了化合物12和13的波谱数据。通过细胞病变法(CPE)对分离得到的部分化合物进行抗H5N1病毒活性评价,结果发现异牡荆素(11)和化合物X有抗H5N1病毒活性,其中化合物X具有明显的抗H5N1病毒活性,药物浓度为37.5μg/mL时,CPE结果为“++”,且有较好的剂量依赖关系,而且该单体化合物在肺形草中含量高,具有进一步研究开发的潜力,有望成为抗禽流感药物研究的新的先导化合物;化合物11具有一定的抗H5N1病毒活性,药物浓度为150μg/ml时,CPE结果为“+++”。
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