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鼻咽癌是我国南方省份和东南亚地区一种高发的恶性肿瘤,有着特殊的种族和地理分布。病因学研究认为,鼻咽癌是由遗传因素、环境因素、EBV (Epstein-Barr virus)感染共同作用引发的。由于鼻咽癌发生时没有明显的病痛,鼻咽癌患者被确诊时往往已经是晚期阶段。目前为止,鼻咽癌的发病机理研究虽然取得了很大的进展,但是其真正的发病机制仍尚未完全阐明,这就使得鼻咽癌的早期诊断及临床治疗非常困难。因此,找到与鼻咽癌早期诊断相关的信号分子并应用于临床有着重要的意义。肝癌缺失基因-1(Deleted in liver cancer1, DLC1)是Yuan等在1998年首次从肝脏组织中通过代表性差异分析(representational difference analysis, RDA)方法克隆获得。本课题组的前期研究发现DLC1在鼻咽癌中出现较高比例的表达下调或缺失,而这种改变与DLC1启动子区域DNA异常甲基化和微卫星位点的杂合性丢失(LOH)有关。为进一步研究DLC1在鼻咽癌中的作用机制,本课题组选择了DLC1基因表达缺失的高成瘤、高转移鼻咽癌细胞系5-8F,利用稳定转染技术过表达DLC1,建立稳定表达DLC1基因的细胞系5-8F-DLC1及对照组细胞系5-8F-vector。研究发现,过表达DLC1的5-8F细胞,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞骨架的形成和分布发生改变,细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力均呈现不同程度的下降。本研究拟在前期工作基础之上,进一步研究DLC1在鼻咽癌中的作用机制。目的：应用基因表达谱芯片技术,筛选出过表达DLC1的鼻咽癌细胞中差异表达的基因,分析其中差异表达的基因的内在联系,研究DLC1在鼻咽癌中的作用机制。方法：1利用基因表达谱芯片技术对5-8F-vector和5-8F-DLC1两株细胞进行分析,然后用生物分子功能注释系统MAS3.0中的KEGG以及GO软件对芯片结果中差异表达的基因进行生物信息学分析,预测DLC1在鼻咽癌中可能参与调控的信号通路及关键分子。2利用RT-PCR和Real-time PCR技术对芯片结果中部分上调和下调的基因进行验证。3应用流式细胞术对5-8F-vector和5-8F-DLC1两株细胞进行细胞凋亡检测。4利用线粒体膜电位检测试剂盒对5-8F-vector和5-8F-DLC1两株细胞进行线粒体膜电位检测。5运用western blot技术对线粒体凋亡相关分子进行检测,初步探讨DLC1促进鼻咽癌细胞凋亡的作用机制。6运用western blot技术对转移相关分子进行检测,初步探讨其抑制鼻咽癌转移的作用机制。结果：1基因表达谱分析发现,与5-8F-vector细胞相比,5-8F-DLC1中454个基因表达上调,如IGFBP7、TNS1、TP53、TP63等386个基因表达下调,如EGFR、KRAS、TGFβ32等。GO分析发现,DLC1引起21种生物学功能发生了改变；KEGG分析发现,DLC1可能参与调控30条不同的信号通路。2RT-PCR和Real-time PCR技术对芯片结果中部分上调基因(WNT5A、TNS1、FHL1、S100A2、RECK、DUSP、CASP9、IGFBP7)以及下调的基因(EGFR、CDCP1、KRAS、TGFβ2、Akt3、MMP7、 MUC4、BCL10、PTK6)进行验证,结果与芯片数据一致。3流式细胞仪结果显示,5-8F-DLC1细胞凋亡率明显高于5-8F-vector细胞。4线粒体膜电位检测发现,5-8F-DLC1细胞膜电位低于5-8F-vector细胞。5Western blot结果显示,与5-8F-vector细胞相比较,5-8F-DLC1细胞中与凋亡相关的分子(如caspase9、caspase3、细胞色素c、Bcl-2、 Bax等)以及转移相关的分子(如MMP2、MMP7、MMP9、Snail、 E-cadherin、TRAF5、NF-κB等)均发生了明显的改变。结论1在鼻咽癌中过表达抑瘤基因DLC1,会影响鼻咽癌细胞中的部分瘤基因、抑瘤基因以及其它一些重要的信号分子的表达。生物信息学分析表明,DLC1参与调控鼻咽癌细胞中一些重要的信号通路。2DLC1能通过线粒体凋亡通路促进细胞凋亡。3DLC1可能通过PI3K/Akt/NF-KB/Snail或TRAF5/NF-KB/Snail信号通路抑制鼻咽癌细胞的侵袭和转移。