SIRT1沉默对人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1生物学功能的影响

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目的观察沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator2 homolog 1,SIRT1)基因沉默对人甲状腺乳头状癌(thyroid papillary carcinoma,TPC)细胞株TPC-1生物学功能的影响。本研究以人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1为模型,通过SIRT1siRNA干扰SIRT1基因的表达,使SIRT1在TPC-1细胞中表达沉默。同时通过检测细胞增殖、衰老、凋亡及周期的改变,从而研究SIRT1对人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1生物学功能的影响,以进一步探索SIRT1在肿瘤的发生、发展中的作用机制。方法1.首先利用SIRT1siRNA技术下调SIRT1在甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1中的表达:分别利用多个不同浓度、不同序列的SIRT1siRNA转染体外培养的人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1中,干扰SIRT1在TPC-1中的表达,同时应用qRT-PCR方法检测SIRT1siRNA的干扰效率,筛选出干扰效率最强的SIRT1siRNA,并用Western blot验证SIRT1蛋白的表达情况。2.各实验分成3组:利用SIRT1siRNA干扰SIRT1表达的TPC-1细胞为实验组(SIRT1siRNA组)、NCsiRNA处理的TPC-1细胞为阴性对照组(NCsiRNA组)及未经过任何处理的TPC-1细胞为空白对照组(TPC-1),分别利用CCK8法检测3个不同处理组TPC-1细胞第13天增殖的变化,应用β-半乳糖苷酶染色法检测SIRT1沉默后对TPC-1细胞衰老的影响,利用Hoechst染色法检测其对TPC-1细胞凋亡的影响,最后通过流式细胞技术检测其对TPC-1细胞凋亡与周期的影响,每种实验均重复3次,并进行统计学分析。结果1.转染SIRT1siRNA的人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1较对照组的细胞SIRT1 mRNA的表达均有降低,其中以100nmol/L的序列SASIHs0100153667干扰效果最强(P<0.05),SIRT1蛋白亦呈低表达。2.CCK8基因敏感性检测示d1、d2、d3 SIRT1siRNA组细胞增殖率显著低于空白对照组及阴性对照组的TPC-1细胞增殖率(P<0.05),转染细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色法显示实验组较空白对照组及阴性对照组衰老细胞比例明显增加(P<0.05);Hoechst染色法发现实验组凋亡细胞比例明显升高(0.09±0.01,P<0.05);流式细胞技术检测发现实验组凋亡细胞比例明显升高(65.22%±0.41%,P<0.05);流式细胞技术细胞周期检测发现实验组细胞出现G1期停滞(67.99%±0.87%,P<0.05)。结论序列SASIHs0100153667的SIRT1siRNA能成功干扰TPC-1中SIRT1基因的表达;SIRT1在人甲状腺乳头状癌株TPC-1的低表达能抑制细胞的增殖能力,阻滞细胞周期,并且能诱导细胞的衰老及促进细胞的凋亡。说明SIRT1在甲状腺乳头状癌的生物学功能中起着肿瘤促进因子的作用,通过将这一因素作为靶点,可能在甲状腺乳头状癌的诊治研究中取得进一步突破。
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