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野生动物为了适应环境以及确保其后代能够生存,在长期的进化过程中形成了各自独特的繁殖策略,如季节性繁殖等。影响野生动物季节性繁殖的环境因素包括光照周期(日照长度)、温度和食物供给等,然而这些外界环境因素对野生动物繁殖的作用机理尚不清楚。近年来的研究发现kisspeptin与leptin可能分别介导光照周期与能量状态对繁殖起调节作用。因此,本项研究以典型的季节性繁殖动物野生雄性达乌尔黄鼠为研究对象,阐明野生达乌尔黄鼠睾丸功能季节性变化的生理过程中,下丘脑中kisspeptin与脂肪源激素leptin对下丘脑-垂体-性腺轴的调节作用。不同月份采集野生雄性达乌尔黄鼠,获得下丘脑、睾丸组织及血清样品,进行形态学与组织学观察、免疫组织化学、Western blotting、 real-time PCR实验及激素测定。形态学与组织学结果显示达乌尔黄鼠睾丸大小、重量及精子发生量化评价从繁殖期至非繁殖期显著下降,而在冬眠期前显著上升。(1)野生达乌尔黄鼠睾丸中Bcl-2、Bax及PCNA的免疫组织化学显示Bcl-2定位于精母细胞中;Bax定位于精原细胞与精母细胞中;PCNA在的睾丸组织中的间质细胞以及处于分裂时期的精原细胞与精母细胞中阳性。Westernblotting结果显示Bcl-2与PCNA在繁殖期与冬眠期前睾丸中的免疫活性显著高于非繁殖期;而Bax在非繁殖期的免疫活性显著高于繁殖期与冬眠期前。(2)在下丘脑中的研究结果显示AR与ERα在不同时期下丘脑中免疫活性没有显著变化,而ERβ在下丘脑中免疫活性在非繁殖期显著降低。kisspeptin在AVPV区免疫活性在冬眠期前显著上升,在整个下丘脑中的mRNA与蛋白水平在繁殖期最高,在非繁殖期显著下降,在冬眠期前显著上升。GPR54与leptin受体在ARC区的免疫阳性及整个下丘脑中mRNA与蛋白水平呈现正相关性,在非繁殖期显著降低。(3)从非繁殖期到冬眠前野生雄性达乌尔黄鼠体重及脂肪含量显著增加。leptin受体在睾丸中免疫组织化学结果显示在繁殖期,leptin受体在间质细胞、支持细胞以及不同类型的生殖细胞中均有阳性表达;在非繁殖期与冬眠期前的睾丸中,leptin受体主要定位于间质细胞与精母细胞。leptin受体在不同时期野生雄性达乌尔黄鼠睾丸中的Western blotting结果显示leptin受体的免疫活性从繁殖期到非繁殖期显著降低,而在冬眠前显著上升。(4)野生雄性达乌尔黄鼠血清中睾酮浓度在繁殖期最高;在非繁殖期七月份血清中睾酮浓度显著下降至最低;在冬眠期前九月份血清中睾酮浓度又显著上升。野生雄性达乌尔黄鼠血清中瘦素浓度在非繁殖期温和上升,而在冬眠期前达到峰值。研究结果表明,在雄性野生达乌尔黄鼠中,kisspeptin与leptin可能分别作为光周期与能量状态的marker,从而影响下丘脑-垂体-性腺轴活力,引起野生雄性达乌尔黄鼠睾丸中细胞增殖与细胞凋亡呈现季节性变化,导致睾丸重量与体积周期性缩小与回复。