基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)产生于正常组织细胞(包括成纤维细胞、结缔组织细胞、内皮细胞等)和肿瘤细胞，以前酶形式分泌，于细胞外间隙激活后而具有降解细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的蛋白水解酶活性。由于MMOs在ECM的破坏与降解过程中的重要作用，使其在组织损伤修复、细胞调亡、骨改建、胚胎发育、血管生成等生理过程和许多病理过程如多样硬化、狼疮、风湿、牙周疾病、肾小球肾炎、动脉粥样硬化、组织溃疡，特别是癌细胞侵袭与转移等方面发挥着十分重要的作用。MMP24又称膜型基质金属蛋白酶5(membrane-type matrix metalloproteinase 5，MT5-MMP)是新近发现的MMPs中的一员，其主要在脑中表达，另外在肾、胰腺和肺中也有一定的表达，MMP24在脑瘤、肾病等的发生发展机制及其诊断、治疗等方面具有重要作用。因其功能发挥关键在于MMP24的酶活性区域，即催化区(eatalytic domain)，本研究正是针对MMP24催化区进行开展的。 本研究通过体外表达获得了MMP24催化区重组蛋白(rMMP24-CD)，制备了针对该蛋白的高亲和力和特异性的单克隆抗体，旨在为MMP24的功能研究和脑瘤、肾病等的发生发展机制研究及其诊断、治疗、预后评价等提供有力的工具。同时，以其为靶标，进行了特异性核酸适体(aptamer)筛选的摸索，初步建立了该蛋白的CE-SELEX技术平台，为进一步开发抗体替代物核酸适体奠定基础。 将含MMP24催化区基因的pET-15b．MMP24-CD载体转化GM感受态细胞，然后经IPTG诱导表达获得MMP24催化区重组蛋白(rMMP24-CD)，采用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化该蛋白，最终得到可溶性MMP24催化区重组蛋白，纯度80％以上，浓度0.6 mg/mL。 以重组蛋白rMMP24-CD免疫BALB/c小鼠，应用单克隆抗体制备技术筛选获得10株可分泌针对rMMP-CD的抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为3A10、3C1、986、9C4、9C8、9F5、9Gll、9Hll、6E4、984。运用3A10、986和9Gll三株细胞免疫小鼠制得3种腹水，效价分别为1:2.5x106，1:1.3x106，1；6.4×105。Western Blot实验表明，三种腹水特异性良好，且以3A10最好。SPR实验初步分析三种腹水的亲和性，结果表明三种腹水均可与rMMP24-CD结合，但3A10结合快，解离慢，亲和力高；986结合快，解离较快，亲和力中等；9H11结合较慢，解离最快，亲和力差。 核酸适体作为一种新的具有抗体性质的核酸，在亲和力上与抗体相当，在特异性上可以达到识别一个甲基的水平，在稳定性、重复性、靶物质范围、筛选方法等方面都优于传统的抗体。本研究以rMMP24-CD为靶蛋白，设计合成了大小为78个碱基的ssDNA文库(含40个碱基的中间随机区)，采用高效毛细管电泳技术对其核酸适体(aptamer)筛选技术和平台建立进行了一定的摸索。通过研究，摸索建立了靶蛋白．核酸混合反应物的毛细管电泳分离条件和馏分收集方法，以及PCR扩增条件、次级文库制备方法。经过两轮筛选后，CE-LIF亲和实验结果表明，针对rMMP24-CD的特异性核酸适体得到了富集，初步建立了CE-SELEX技术平台。