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【目的】研究喹啉酸(quinolinic acid,QUIN)对原代培养的皮层神经元的作用及其影响因素,为开发新的神经保护剂寻找可能的靶点。【方法】以形态学、生物化学、免疫组织化学、高效液相色谱、激光扫描共聚焦显微镜观察等方法和技术研究QUIN和N9小胶质细胞株培养液(N9 microglial cell line medium,MCLM)单用和联合使用对原代培养的小鼠大脑皮层神经元的生长、活度、完整性等的作用,分析这些作用与兴奋性氨基酸及其受体、细胞因子、细胞内钙和氧化应激的关系。【结果】1、不同浓度的QUIN单用对皮层神经元的作用有显著质的差异。低浓度(10和100μmol/L)有利于神经元生长,使树突和触突更丰富,突起间网络更明显,MTT值较对照组升高,神经元LDH漏出量降低;500μmol/L和1 mmol/L QUIN对神经元形态、活度和完整性无明显影响;高浓度QUIN(3和5 mmol/L)呈浓度依赖性损伤神经元,显示胞体肿胀,失去折光性,细胞膜破裂,神经元数目减少,MTT值明显降低,LDH漏出量明显升高。2、MCLM单用呈浓度和时间依赖性损伤神经元。以1:1稀释度的MCLM作用最明显;作用3 h神经元形态、数量、活性和完整性已开始出现明显病理变化。1:30稀释度的MCLM对神经元形态、数量、活性和完整性均无明显影响。3、1:30稀释度的MCLM与QUIN合用增强后者对神经元的损伤作用。显示取消了低浓度QUIN(10和100μmol/L)对神经元生长的有益影响,甚至使500μmol/L和1 mmol/L的QUIN出现明显毒性作用。4、AP-5和DNQX预先加入不影响10μmol/L QUIN对神经元生长的有益作用;但AP-5预先加入明显降低5 mmol/L QUIN及1:30 MCLM与1 mmol/L QUIN联用对神经元的损伤作用,而DNQX预先加入无此明显作用。5、5 mmol/L QUIN及1:30 MCLM与1 mmol/L QUIN联用使神经细胞培养液中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10水平,氨基酸Glu、Asp含量,MDA水平及细胞内游离钙浓度升高,SOD活性降低,而IL-6水平变化不大; AP-5预先加入能显著阻遏上述指标的变化,而DNQX预先加入除显著阻遏神经细胞内钙增加外,对其它指标无明显影响。【结论】1.QUIN对离体培养神经元有双向作用,即低浓度(10和100μmol/L)有益于神经元生长,而高浓度(≥3 mmol/L)对神经元有显著损伤作用。2.小胶质细胞在神经元的损伤过程中起着重要作用。其分泌物能损伤神经细胞,也增强QUIN对神经细胞的损伤作用。3.高浓度QUIN(5 mmol/L)及中浓度QUIN(1 mmol/L)与低浓度MCLM(1:30)合用对神经元的损伤机制部分与NMDA受体激动有关,也与兴奋性氨基酸释放,细胞因子TNF-α和IL-1β分泌增多,钙超载和氧化应激反应增强有关,而与AMPA和海人藻酸(kainate)受体关系不大。4.低浓度QUIN有益于神经元生长的作用与兴奋性氨基酸及NMDA受体关系不大,其机制有待阐明。