厚皮甜瓜果实RNA的提取及采后硅酸钠处理对其防卫基因的诱导表达

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随着甜瓜采后诱导抗病性研究的深入,对防卫基因的诱导表达分析已成为亟待研究的内容。本文以厚皮甜瓜“银帝”(Cucumis melo L. cv. Yindi)为材料,对果实RNA的提取方法主要条件进行了筛选,并对果实中7个防卫基因在100mmol硅酸钠处理和Trichothecium roseum挑战接种下的表达模式进行了分析。结果表明:1.1ml Trizol提取200mg果实量时可得到最多的RNA量,氯仿抽提2次可使所提取RNA的A260/A280在1.9-2.0之间,所提取的RNA无蛋白质和DNA污染。室温沉淀和低温沉淀对RNA的产量无明显差异。提取的RNA可顺利反转录,反转录产物稀释5倍后扩增β-actin基因片段与设计大小一致,验证了该方法提取的RNA可用于RT-PCR。2.cDNA模板量在经过几次调整后,基本达到均一化,用标准Marker比较法验证了MCHT、PAL、SOD、POD、APX和LOX基因,用测序比对的法验证了CHS基因,并得到了甜瓜CHS基因片段序列。由此表明,用标准Marker比较法和测序比对的法可验证扩增的基因,设计的引物可做表达分析。3.硅酸钠处理和处理后的挑战接种提前了MCHT和SOD基因表达高峰2d,而且也提高了表达量;处理后的挑战接种提高了PAL和CHS基因的表达量;处理后POD基因表达高峰延长了2d,提高了挑战后POD基因表达量;APX和LOX基因表达明显可被硅酸钠处理抑制。由此表明,硅酸钠处理后诱导了果实的抗病性。
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