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目的:他克莫司为免疫抑制剂,多用于对抗器官移植后的排斥反应,除此之外,其还具有抗增殖作用,对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)及血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)的增殖也有作用。血小板源性生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)作为一种强烈的有丝分裂原,能促进多种细胞的增殖与迁移,对ECs和VSMCs也有作用。本研究旨在观察两种药物联合应用时,在不同的药物浓度作用下,对VSMCs和ECs细胞增殖与迁移的差异性作用效果,探究其内在机制,研究两种药物作为负载药物在血管损伤后,对于抑制血管内皮过度增殖增厚的作用。方法:体外培养VSMCs和ECs,分别用不同浓度的他克莫司和PDGF-BB单独分别对待两种细胞,CCK8法确定两种药物单独作用效果以及有效浓度范围。之后将两种药物在有效浓度范围内以不同浓度下配合使用于两种细胞,CCK8法确定两种药物联合作用效果。CCK8法及细胞毒性实验确定药物安全浓度,利用流式细胞术检测两种细胞的细胞周期变化来确定两种药物对于细胞周期的影响,蛋白免疫印迹法检测增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)来反应药物联合时对细胞增殖的影响,检测PDGF-β受体(PDGFRβ)、磷酸化的PDGFRβ(phospho-PDGFRβ,p-PDGFRβ)、Akt-mTOR信号通路中相关蛋白的磷酸化水平来探究其内在机制。细胞划痕实验检测两种药物联合时在不同的药物浓度下对细胞迁移的影响。利用兔颈动脉和裸球囊在体内制作血管内膜损伤模型,28天后通过孔渗球囊将两种药物按照有效药物浓度在损伤部位释放。1月后进行取材,石蜡包埋切片后HE染色后,利用Image J软件对图像进行测量,收集数据并分析。测量数据包括:内膜平均厚度、中膜平均厚度、I/M(内膜厚度/中膜厚度)。之后对数据进行分析比较。结果:1.药物单独作用时,PDGF-BB可明显促进两种细胞增殖迁移,且其效果呈效应-浓度依赖关系,浓度在10-20ng/ml时效果最佳;他克莫司在一定浓度范围内无细胞增殖抑制作用(EC:0-20μg/ml;VSMC:0-10μg/ml)。2.两种药物联合时:2-5μg/ml他克莫司加上10ng/ml的PDGF-BB的药物组合能有效抑制细胞内DNA合成、能使细胞周期停留在G0/G1期,且造成细胞迁移抑制,这种抑制效果在VSMCs内更强烈。提高PDGF-BB浓度,在相同的他克莫司浓度水平下,药物联合作用的抑制增殖效果减弱。3.单层细胞群边缘及伤痕处ECs及VSMCs中有PDGF的β型受体的表达,2-5μg/ml他克莫司加上10ng/ml的PDGF-BB的药物组合作用下,磷酸化的PDGFRβ型受体及磷酸化的Akt的活化没有显著区别,而对于磷酸化的mTOR,ECs中的明显高于VSMCs组。4.体内抑制作用:3μg/mm~2他克莫司加上10ng/mm~2的PDGF-BB的药物组合能促进内膜的增生,同时相较于无药物作用组,及单独药物作用组,内膜厚度明显变小。结论:在2-5μg/ml他克莫司加上10ng/ml的PDGF-BB的药物组合作用下,能在有效促进内皮细胞增殖迁移的同时,能够抑制血管平滑肌细胞的增殖迁移。其作用机制是在VSMCs内,PI3K-Akt-mTOR途径被更多抑制有关。对受损伤的血管内膜,3μg/mm~2他克莫司加上10ng/mm~2的PDGF-BB的药物组合能促进内膜的增生,对抑制中晚期血管内膜的过度增厚有显著意义。