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DNA电化学生物传感器能够实现在低浓度下对特定序列的DNA简单、快速的检测,纳米材料为DNA电化学生物传感器的研究提供了新的途径。本文探讨了纳米金溶胶及Au@SiO2的合成条件,基于自组装作用分别将它们自组装到壳聚糖修饰的金电极上用于DNA的固定,成功制备了DNA电化学生物传感器,并对其电化学性能进行检测。主要工作包括三个部分:
第一部分,纳米金溶胶/Au@SiO2的制备。首先合成了纳米金溶胶及二氧化硅,进而制备了以金为核,二氧化硅为壳的Au@SiO2纳米粒子。通过变换柠檬酸钠用量和温度探讨了硼氢化钠还原法制备纳米金溶胶的最佳条件,并与经典的柠檬酸钠还原法做了比较;通过改变氨水、无水乙醇和超纯水的用量得到了不同粒径的二氧化硅纳米粒子;结合超声波技术,成功制备了核壳型Au@SiO2纳米粒子。高倍透射电镜表征表明,Au@SiO2纳米粒子核层金的粒径在16nm左右,壳层SiO2的粒径在55nm左右。
第二部分,基于壳聚糖/纳米金制备的DNA电化学生物传感器研究。氨基与金原子之间具有强静电吸附作用,根据层层自组装原理,利用壳聚糖良好的成膜性能及大量的氨基将纳米金溶胶固定到壳聚糖修饰的金电极上,进而固定巯基修饰的DNA片段,以实现对目标DNA序列的定量检测。在pH=7.4的PBS底液中,以亚甲基蓝为杂交指示剂,用循环伏安法(CV)和差分脉冲伏安法(DPV)对各修饰电极的电化学行为进行研究,结果表明:在优化的实验条件下,杂交前后峰电流差值与目标DNA浓度的对数在10-8mol/L~10-5 mol/L内具有较好的线性关系,检测限为3.55×10-9mol/L。
第三部分,基于壳聚糖/Au@SiO2纳米粒子制备的DNA电化学生物传感器研究。核壳型Au@SiO2纳米粒子兼其金和二氧化硅纳米粒子的优良特性,将其用于DNA的固定,可以提高DNA电化学生物传感器的检测限。电化学检测结果表明:在优化的实验条件下,杂交前后峰电流差值与目标DNA浓度的对数在10-10mol/L~10-6mol/L内具有较好的线性关系,检测限为4.02×10-11mol/L。