三酶磁驱固定化酶制备及其在清除大水体PAHs中的应用

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多环芳香烃类(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)是目前主要环境水体的有机化工污染物之一。因为其污染来源广、毒性危害严重受到广泛关注。目前对于PAHs处理的方法主要有物理吸附、萃取、分离以及化学氧化催化和生物处理等方法。然而这些处理方法在成本控制、处理时间周期以及再污染威胁等方面存在或多或少的缺陷,使得在处理突发性的发生在环境水体的PAHs污染方面不尽人意。生物酶因其催化效率高、反应条件温和、活性可调节、处理周期短、方便储存、快速运输及可第一时间投入使用等特点在处理突发性PAHs污染方面具有显著优势,但是游离酶同样存在相对价格较高、难于回收、无法避免二次污染的缺点,这极大的限制了游离酶在清除自然水体突发性PAHs污染的应用。与游离酶相比,固定化酶降低酶成本,稳定性更好,易从反应系统中分离,成为现代酶学工业应用的新宠。目前主要应用固定化过氧化酶处理PAHs,这类酶制剂催化效率较高,但是在执行其催化功能时,需要向环境中投放H2O2作为底物氧化物。H2O2直接加入水体对水体生物会造成伤害。本论文中,以氨基修饰的硅基覆盖的顺磁性Fe3O4纳米粒子为载体,构建地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(α-Amylase)、黑曲霉葡萄糖氧化酶(GOD)、猪血红蛋白(Hb)的磁驱三酶反应器。控制反应器中各个酶的比例和取向,实现级联反应中间产物的高效转化和低渗漏,在兼顾水生生物安全前提下,有效解决PAHs污染。反应体系中,利用交变磁场实现对磁驱三酶反应器的释放、驱动及回收。控制磁驱三酶反应器中间产物葡萄糖和H2O2的高效转化是本论文的研究重点。通过调节三种酶在反应器中的比例和空间定位关系,在提高反应器催化能力的前提下,降低中间产物泄漏。以α-Amylase:GOD:Hb摩尔比为55:40:45进行磁驱三酶反应器制备时,无外磁驱存在情况下,6mg/ml固定化酶制剂投入反应3小时后,淀粉水解率大于81%,PAHs模拟物ABTS清除率大于67%,磁驱三酶反应体系呈现最佳催化能力与最低中间产物泄露能力:单层磁驱三酶反应体系,中间产物葡萄糖泄露浓度低于80mg/L,H2O2泄露浓度低于0.5mg/L;与单层磁驱三酶反应体系相比,双层磁驱三酶反应体系葡萄糖和H2O2泄露分别为单层体系的20%和35%。即双层磁驱三酶反应器具有更低的中间产物泄露概率。有磁场存在情况下,磁驱三酶反应体系中Hb活性呈现明显增强,三酶反应器呈现更优的PAHs清除率和更低的中间产物泄露能力。三酶磁驱固定化酶具有较好的稳定性,经过八次重复使用,酶制剂呈现较好的活性稳定性和回收性。酶制剂4℃保存2个月未见活性损失。
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