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背景慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染后的经典三步曲即慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化和原发性肝癌。抗病毒是慢性乙型肝炎的主要治疗方法，包括干扰素(IFN-ot)和核苷(酸)类似物，以清除病毒、延迟肝硬化、肝癌的进展以及提高生存率为长期治疗目标。长期以来，肝功能、乙肝五项和乙型肝炎病毒载量(HBVDNA)等实验室指标一直是评估乙肝患者病情的经典标志。随着科技的进步，许多与CHB患者抗病毒疗效相关的遗传背景标志物开始出现。本课题组前期采用前瞻性研究发现雌激素受体1(ESR1)单核苷酸多态性(SNP)与IFN-a初治患者早期病毒学应答相关。除了本课题组之外，尚无关于ESR1SNP与CHB患者抗病毒疗效的相关性研究，因此，本研究在扩大样本量、延长随访时间以及增加相关SNPs的基础上进一步分析基因单核苷酸多态性、基因mRNA表达水平以及干扰素抗病毒疗效之间的相关性，IFN-a和恩替卡韦(ETV)均因疗效好耐药率低而被视为CHB初治患者的一线用药，我们对ESR1SNP与恩替卡韦抗病毒治疗的可能相关性也进行了分析，以期为CHB患者干扰素和恩替卡韦抗病毒治疗提供新的预测因素。目的以IFN-a和ETV初始抗病毒治疗的CHB患者为研究对象，选取了3条基因0&识7、MxA和e/F-2a)和7个SNP(rs2077647、rs9340799、rs2234693、rs322354、rs2071430、rs3759755以及rs3759756)，对CHB患者抗病毒治疗(IFN-a和ETV)疗效与宿主基线特征、基因单核苷酸多态性以及基因mRNA表达水平的相关性进行了探讨。方法本课题共收集了248例初始抗病毒治疗的CHB患者,包括172例使用IFN-α抗病毒治疗的HBeAg阳性患者和76例使用ETV抗病毒治疗的HBeAg阳性或阴性的患者。我们对患者抗病毒治疗第4周、12周、24周、48周、72周以及96周的病毒学应答进行评估,采用QIAGEN DNA抽提试剂盒对所有病例进行了基因组DNA的提取,综合使用限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及质谱分析的方法对ESR1rs2077647、rs9340799、rs2234693和rs322354,eIF-2a rs3759755和rs3759756以及MxA rs2071430进行了基因型分型,采用荧光染料实时定量(SYBR Green RT-PCR)法检测了103例IFN-α抗病毒治疗患者治疗前、中、后各时间点外周血单个核细胞(PBMCs)中的3条基因(ESR1、eIF-2α和MxA)mRNA的表达水平以及采用凝胶移动抑制分析(EMSA)实验检测了eIF-2α基因rs3759755不同等位的核蛋白结合能力。采用SPSS13.0软件对数据资料进行统计分析。结果1.通过多因素分析,我们发现基线HBVDNA水平与IFN-α快速病毒学应答(OR=1.718,95%CI:1.184-2.492, P=0.004)和早期病毒学应答(OR=1.457,95%CI:1.008-2.107, P=0.045)均有显著相关性,且发生快速病毒学应答(RVR)的患者更易发生早期病毒学应答(OR=9.123,95%CI：3.507-23.735,P<0.001)；接受IFN-α治疗的患者中基线HBsAg水平(OR：1.000,95%CI：1.000-1.000,P=0.018)、基线HBeAg水平≤200S/CO (OR:0.009,95%CI:0.001-0.077,P<0.001)、12周HBeAg≤10S/CO (OR:0.196,95%CI:0.069-0.560,P=0.002)以及早期病毒学应答(OR：0.101,95%CI：0.022-0.470,P=0.003)与72周病毒学应答均有显著相关性。基线HBVDNA水平对恩替卡韦24周、48周病毒学应答有重要的预测意义(P<0.05)。2.我们在172例IFN-a初治HBeAg阳性CHB患者中对3条基因上的7个SNPs进行了分型(ESR1基因的rs2077647、rs9340799、rs2234693和rs322354; MxA基因的rs2071430;eIF-2α基因的rs3759755和rs3759756),结果发现早期病毒学应答率在rs2077647TT、TC和CC基因型组间存在显著差异(χ2=6.240,P)=0.044),且携带至少一个rs2077647T等位基因的患者早期病毒学无应答率显著高于CC基因型(TT+TC vs.CC,χ2=6.189, P=0.013),但在校正基线ALT、基线HBVDNA以及RVR之后差异均无统计学意义(分别为OR：0.727,95%CI：0.279-1.889,P=0.512和OR：1.585,95%CI：0.277-9.060,P=0.604)；我们的单因素分析结果还显示72周病毒学应答率在rs2234693TT、TC和CC基因型组中存在显著差异(χ2=6.478,P=0.039),且携带至少一个rs2234693C等位基因的患者72周病毒学应答率显著高于CC基因型(66.4%vs.46.4%,χ2=6.258,P=0.012); rs2071430GG、GT和TT基因型组间的72周病毒学应答率也存在显著差异(χ2=8.079,P=0.018),携带TT基因型患者72周病毒学无应答率显著高于至少携带至少一个C等位基因的患者(66.6%vs.37.0%,χ2=5.899,P=0.015)；rs3759756AG基因型组中的72周病毒学无应答率明显高于AA基因型(77.3%vs.34.7%,2=14.498,P<0.001),但在校正基线HBsAg水平、基线HBeAg水平、12周HBeAg水平、RVR及EVR之后,只有.(?)IF-2α基因上的rs3759756与IFN-α72周病毒学应答显著相关(OR=37.988,95%CI：1.665-86.6737,P=0.023),提示携带rs3759756AG基因型的患者在72周发生病毒学无应答的几率远远高于AA基因型患者。3.我们在76例恩替卡韦初治的CHB患者中检测了ESRl基因上的2个SNPs(rs2234693和rs9340799),单因素分析结果显示48周、96病毒学应答率在rs2234693TT、TC和CC基因型组间均存在显著性差异(分别为57.1%vs.87.8%vs.58.3%,P=0.012和64.3%vs.96.7%vs.87.5%,P=0.018),在校正了基线TBIL水平后发现,至少携带一个rs2234693C等位基因的患者48周、96周病毒学应答率均明显高于TT基因型患者(分别为81.1%vs.57.1%,95%CI：1.026-14.785,P=0.046和94.7%vs.64.3%,95%CI：1.456-57.509,P=0.018)。4.通过检测103例接受FN-α治疗的HBeAg阳性ICHB患者中的ESR1、MxA和.?IF-2α基因在IFN-α治疗前、中及治疗后个时间点1nRNA的表达水平,发现女性患者72周病毒学应答组的基线mRNA水平显著高于无应答组(9.2722±6.448vs.6.041±6.738,Z=-0.207,P=0.038),且基线ESR1RNA表达水平与基线HBVDNA呈负相关(r=-0.750,P<0.001)。男性患者随访至72周时,病毒学应答组的ESR1mRNA水平显著高于无应答组(21.838±39.775vs.1.929±1.174,Z=-2.162,P=0.031)。MxA和eIF-2a基因的1nRNA表达水平在IFN-α治疗前后均无显著变化(P>0.05)。5.携带eIF-2α rs3759756AG基因型的CHB患者中IFN-a72周病毒学无应答率显著高于AA基因型患者,凝胶移动抑制分析(EMSA)实验发现rs3759756A、G特异性等位位点存在核蛋白结合差异,且A等位与核蛋白的结合量约为G等位的3倍,AA和AG基因型患者中eIF-2α mRNA表达水平的差异可能与此有关。结论1.基线HBVDNA水平和ESR1rs2234693对恩替卡韦的病毒学应答均有重要的预测意义。2.在IFN-a初治的HBeAg阳性CHB患者中,基线HBVDNA水平和RVR对快速和早期病毒学应答均有预测意义；基线HBsAg水平、HBeAg水平≤200S/CO、12周HBeAg水平≤10S/CO、EVR以及.?IF-2a rs3759756对72周病毒学应答有重要的预测意义；女性患者中,治疗前PBMC ESR1mRNA表达水平对72周病毒学应答有预测意义,且与基线HBVDNA水平负相关；干扰素能显著增加72周病毒学应答男性患者中ESR1mRNA的表达水平。3. EIF-2αmRNA表达水平与IFN-α病毒学应答无显著相关性,但在rs3759756AA和AG基因型组中的分布存在显著差异,可能与rs3759756两种等位对核蛋白的结合能力的差异有关。