RASSF1A基因转染对骨肉瘤细胞株MG63细胞增殖、凋亡的作用研究

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目的:RASSF1A是一种新型候选抑癌基因,其抑癌作用见于人类多数肿瘤中。本研究探讨抑癌候选基因RASSF1A转染对骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖、凋亡的作用,进一步证实该基因的抑癌作用及作用机制,为新型基因替代疗法运用于临床提供实验基础与理论依据。方法:1.构建pCDNA3.1(+)-RASSF1A并鉴定,将空质粒载体及含RASSF1A基因的重组载体运用“脂质体转染法”转染到骨肉瘤MG-63细胞株中。2. western-blot检测基因转染组、空质粒组及空细胞组三者中RASSF1A蛋白的表达水平。3.在基因转染后的24h,48h,72h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测基因转染组、空质粒组及空细胞组三者细胞的增殖情况。4.在基因转染后的24h,48h,72h,原位末端标记法(TUNEL)检测基因转染组、空质粒组及空细胞组三者细胞的凋亡情况。结果:1. RASSF1A基因可在骨肉瘤细胞株MG63中成功转染,pCDNA3.1(+)-RASSF1A在骨肉瘤细胞MG63中构建成功。2.导入RASSF1A基因后,骨肉瘤细胞株MG63中出现RASSF1A蛋白表达现象,而对照组未出现蛋白表达,证实骨肉瘤细胞中存在RASSF1A的表达缺失。3.RASSF1A基因转染后肿瘤细胞株生长增殖过程明显受到抑制,细胞增殖生长速度明显降低,与空质粒组及空细胞组相比有统计学意义(p<0.05)。4.RASSF1A基因转染后肿瘤细胞株出现凋亡细胞增加,细胞凋亡指数明显高于空质粒与空细胞组,差异具有显著统计学意义(p<0.05)。结论:RASSF1A真核表达载体可在骨肉瘤细胞株MG-63中成功转染,肿瘤细胞株中存在RASSF1A表达缺失现象,RASSF1A基因转染后可发挥抑癌作用,其作用机制可能与抑制骨肉瘤细胞增殖、促进细胞凋亡有关。图10副,表8个,参考文献26篇。
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