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肺癌是癌症中最常见的恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率居所有癌症之首。其中非小细胞肺癌(Non Small Cell Lung Cancer,NSCLC)占肺癌总数的80%-85%。目前,NSCLC的治疗主要依靠手术及放化疗,然而,多数病人发现时已是癌症晚期,丧失了最佳手术机会。因此,寻求新的治疗方法越来越重要。MicroRNA(miRNA)是一种单链内源性非编码RNA,大小约22-24nt,是重要的转录后调控因子。大量研究表明miRNA对肿瘤的发生发展起到重要作用。因此,本文主要研究miRNA对NSCLC的影响,包括对细胞增殖,凋亡及周期的调控,并寻找其靶基因,研究miRNA在NSCLC中的作用方式,试图为临床上NSCLC的治疗提供依据。通过Solexa测序我们构建了小鼠NSCLC miRNA表达差异图谱,选择其中表达有显著差异的miR-148a作为研究对象。通过qRT-PCR我们检测出相对于人正常细胞系Beas-2B及正常肺组织,miR-148a在NSCLC细胞系和NSCLC组织中的表达量均有明显差异。通过向NSCLC细胞系H1299中转染miR-148amimics,使胞内miR-148a的表达量升高,结果表明miR-148a可以明显抑制细胞增殖,促进细胞凋亡并抑制细胞于G2/M期,说明miR-148a对NSCLC有重要的抑癌作用。利用TargetScan、Pictar等软件可以预测出miR-148a的潜在靶基因。对潜在靶基因DNMT1、ATP6AP2、MAP3K9、BCL2L11、CDKN1B、PTEN、CDK19、TMED7利用双荧光素酶报告分析进行验证,结果显示DNMT1、ATP6AP2、MAP3K9、BCL2L11、及CDK19的3′非编码区(3′-Untranslated Region,3′-UTR)均不同程度地受到miR-148a的调控,而CDKN1B、PTEN、TMED7的3′-UTR则不受miR-148a调控。进一步将DNMT13′-UTR中与miR-148a结合的位点突变,结果表明突变的DNMT13′-UTR不受miR-148a的抑制调控。qRT-PCR及Western Blot实验检测到胞内过表达的miR-148抑制了DNMT1mRNA及蛋白两个水平的表达。这些结果说明DNMT1是miR-148a的直接靶基因, miR-148a对DNMT1的抑制作用发生在mRNA水平。向NSCLC细胞系H1299中转染DNMT1siRNA,从而抑制DNMT1的表达,结果发现可以明显促进细胞凋亡,抑制细胞周期,与过表达miR-148a作用一致。以上结果说明在NSCLC中,抑制DNMT1是miR-148a的一种作用机制。