节裂角茴香对二斑叶螨杀螨活性的研究

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:liongliong579
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本文以二斑叶螨为靶标试螨,对采自甘肃省境内的32种常见有毒植物的杀螨活性进行了筛选,并对筛选出的植物的作用方式及节裂角茴香杀螨活性成分提取体系、作用机理进行研究,最后通过柱层析、生物活性追踪及GC-MS分析,对节裂角茴香主要杀螨活性物质进行研究。研究结果如下:1.通过对20科32种植物杀螨活性筛选研究,获得5种对二斑叶螨活性较高的植物。结果显示:节裂角茴香甲醇提取物对二斑叶螨雌成螨和螨卵具有很强的活性,处理48h,杀螨及杀卵LC50值为9.010和20.194mg/mL,校正死亡率分别为90.77%和91.43%(浓度为100mg/mL),与已报道具有很高杀螨活性的小果博落回和黄花蒿在同浓度水平下,差异不显著。艾蒿、白头翁、马先蒿、铁棒锤四种植物甲醇提取物对二斑叶螨雌成螨及螨卵也有较高的活性,其48h杀螨及杀卵LC50值分别为14.139、14.891、15.485、17.706mg/mL和30.299、23.815、29.225、20.421mg/mL;对32种植物的杀螨及杀卵活性聚类分析,五种植物提取物可以归为一类。2.对节裂角茴香、艾蒿、白头翁、马先蒿、铁棒锤杀螨作用方式比较研究,五种植物提取物对二斑叶螨杀螨作用方式按LC50排序,为忌避作用>触杀作用>杀卵作用>内吸作用。忌避作用中节裂角茴香提取物作用最强,LC50值为1.868mg/mL,艾蒿、白头翁和铁棒锤次之,马先蒿最弱(LC50值为4.037mg/mL);节裂角茴香提取物触杀作用和杀卵作用最强;艾蒿、白头翁和马先蒿次之,铁棒锤表现最差;艾蒿内吸作用中表现最好,LC50值为177.495mg/mL,节裂角茴香次之,LC50值为233.503mg/mL。节裂角茴香提取物较四种植物杀螨活性高,且对二斑叶螨有忌避作用、触杀作用和杀卵作用。3.节裂角茴香杀螨活性成分提取的最佳溶剂和方法是乙醇和索氏抽提法,节裂角茴香主要杀螨成分集中于地上茎叶部分。在节裂角茴香提取物对二斑叶螨的触杀作用测定中,乙醇提取物的杀螨活性最高,48h恒温振荡法、索氏抽提法和超声波提取法校正死亡率分别为88.60%、95.16%和85.59%,在忌避作用测定中,恒温振荡法和索氏抽提法获得的节裂角茴香乙醇和甲醇提取物对二斑叶螨的忌避作用都很强,两种提取物方法没有差异;在超声波提取法中乙醇提取物活性显著高于其他溶剂提取物;内吸作用测定中,索氏抽提法和超声波提取法获得的乙醇、乙酸乙酯和石油醚提取物杀螨活性差异不显著,但恒温振荡法差异显著;杀卵作用中,乙醇和甲醇提取物杀卵活性差异不显著,但显著高于其他溶剂提取物,三种提取方法差异不显著。4.采用索氏抽提法获得的节裂角茴香乙醇提取物对二斑叶螨的作用机理进行研究,结果表明:节裂角茴香乙醇提取物对二斑叶螨体内谷胱甘肽-s-转移酶(GSTs)有显著激活作用,内吸处理12h时,处理GSTs比活力较对照激活2.59倍;对羧酸酯酶(CarE)酶活力表现较弱激活作用,在处理试螨4h时,处理试螨CarE酶比活力是对照的1.139倍;多功能氧化酶(MFO)酶比活力是先上升后下降再上升的趋势,其激活作用不明显;对乙酰胆碱酯酶(AchE)具有显著的抑制作用,触杀处理试螨12h时,抑制作用最强,处理AchE酶比活力较对照被抑制2.917倍。由此得出,节裂角茴香乙醇提取物对二斑叶螨主要杀螨机理为抑制了乙酰胆碱酯酶(AchE)。5.对节裂角茴香乙醇提取物杀螨活性物质进行分离鉴定,分离出40种化合物,鉴定出了28种。在弱极性流分中主要为高级烷烃类和脂肪酸酯类,如烷烃类总量在植物中含量为56.92%,脂肪酸酯类如正十六烷酸异丙酯,正十六烷酸乙酯、亚油酸甲酯、亚麻酸乙酯各占植物含量的16.13%、6.42%、2.31%和12.09%,少量为环三萜烯酮(羽扇烯[20(29)]-酮-3)及乙酸-五环三萜烯酯(乙酸新伽玛蜡烯酯(3-β)、3β-乙酸羽扇烯酯)分别占植物总量的1.73%、1.87%和1.18%。极性流分中相对丰度高且在植物中含量较高的化合物15-二十九烷醇(5.17%)、高级脂肪酸(异十六碳酸(棕榈酸)、二十四烷酸、二十六烷酸、二十八烷酸)在植物中含量均超过1.9%,还有其他如9,12-十八烷酸、十八烷酸(硬脂酸)、二十烷酸、二十二烷酸、烯酯类(十六碳二烯酸甲酯,在植物中含量为4.54%)及降姥鲛酮等。节裂角茴香乙醇提取物中脂肪酸类、脂肪酸酯类和五环三萜类为主要杀螨活性成分,且异十六碳酸(棕榈酸)、降姥鲛酮及新植二烯、羽扇烯[20(29)]-酮-3、乙酸新伽玛蜡烯酯(3-β)为罂粟科植物中首次发现。
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