【摘 要】
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研究目的:研究长链非编码RNAs（Long noncodingRNAs,LncRNAs）在成人隐匿性自身免疫性糖尿病（Latent Autoimmune Diabetes in Adult,LADA）与2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM）中的表达,并预测LncRNA作用的靶向基因,为LADA和T2DM的诊断及鉴别诊断提供基因表达谱,为糖尿病的基因靶点治疗提供理论
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研究目的:研究长链非编码RNAs（Long noncodingRNAs,LncRNAs）在成人隐匿性自身免疫性糖尿病（Latent Autoimmune Diabetes in Adult,LADA）与2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM）中的表达,并预测LncRNA作用的靶向基因,为LADA和T2DM的诊断及鉴别诊断提供基因表达谱,为糖尿病的基因靶点治疗提供理论及数据基础。研究方法:采集LADA患者（LADA组）、T2DM患者（T2DM组）和正常糖耐量者（NG组）静脉血样各4例,采用高通量测序检测、挑选表达差异有统计学意义的LncRNA来构建基因表达谱,通过cis方式选取临近位点作为LncRNA靶基因,并通过GO及KEGG通路分析推测LncRNA功能。研究结果:1、在LADA组、T2DM组及NG组三组数据的相互对比中,我们发现LncRNA的表达是存在明显差异的,且分布于人类所有染色体上,包括性染色体。2、与NG组相比,T2DM组患者共有68763个LncRNAs显著表达上调,28523个明显表达下调,我们通过cis方式对临近位点预测LncRNA靶标,以Fold Change>=2.0,p-value<=0.05,FPKM>=0.1作为筛选标准,共得到30个具有统计学意义的靶基因,其中有10个靶基因显著表达上调,20个明显表达下调;3、与NG组相比,LADA组患者共有68748个LncRNAs显著表达上调,28538个明显表达下调,我们通过cis方式对临近位点预测LncRNA靶标,以Fold Change>=2.0,p-value<=0.05,FPKM>=0.1作为筛选标准,共得到18个具有统计学意义的靶基因,其中有6个靶基因显著表达上调,12个明显表达下调;4、与T2DM患者相比,LADA患者共有74207个LncRNAs显著表达上调,23079个明显表达下调,我们通过cis方式对临近位点预测LncRNAs靶标,以Fold Change>=2.0,p-value<=0.05,FPKM>=0.1作为筛选标准,共得到6个有统计学意义的LncRNAs靶基因,3个靶基因上调表达明显,3个下调表达显著;5、在三组对比数据中分别选取Fold Change数值最大的9个LncRNA进行定量实时聚合酶链反应进行验证,LncRNA ENST00000424044-FLVCR1、LncRNA ENST00000432511-BTG2、LncRNA ENST00000602845-NCBP2、LncRNA ENST00000364558-HECTD4、LncRNA ENST00000608916-HCCS、LncRNA ENST00000565382-MBTPS1、LncRNA ENST00000499762-A2M、LncRNA ENST00000425189-DBH、LncRNA ENST00000436373-AP001171.1,结果与高通量测序结果一致,通过GO（Gene ontology）、KEGG通路（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）分析来预测参与糖尿病的发病的LncRNAs靶基因。研究结论:1、在LADA/NG组、T2DM/NG组与LADA/T2DM组三组数据中,我们发现LncRNAs在LADA患者、T2DM组患者及糖耐量正常者中的表达存在显著差异。2、在LADA/NG组、T2DM/NG组与LADA/T2DM组三组数据中,我们通过GO分析推测每个LncRNAs存在的细胞成分和参与的生物过程及发挥的分子功能,通过KEGG通路分析推测LncRNAs可能参与的基因调控通路,从而推测它们在糖尿病的发病中的作用机制。3、在LADA/NG组、T2DM/NG组与LADA/T2DM组三组数据中,我们预测了9个LncRNAs作用的靶向基因,为LADA和T2DM的诊断及鉴别诊断提供基因表达谱,并为糖尿病的基因靶点治疗提供理论及数据基础。
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