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研究背景和目的：
食管癌是严重危害人类健康的消化道肿瘤，我国是食管癌高发区，居世界首位，食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cellcarcinoma，ESCC)占全部食管癌的95﹪左右。淋巴道转移是食管癌转移的主要途径<[1]>。
目前环氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)和血管内皮生长因子-c(VEGF-c)在食管鳞癌发生、发展过程中的作用已经成为研究热点。
环氧化酶(cyclooxygenase，COX)是前列腺素(PGs)合成初始步骤中的关键限速酶。研究表明，COX-2与肿瘤细胞生长、细胞凋亡、肿瘤血管生成与转移等有密切关系<[4-5]>。在消化、呼吸等系统发生的多种恶性肿瘤组织中，COX-2mRNA及其蛋白表达水平均有显著上调并且与肿瘤的增殖转移有关<[6-8]>。Tadahiro等<[2]>在一组 ESCC 的研究中发现，COX-2强表达的ESCC患者预后较COX-2弱表达的患者差，在多因素分析中，COX-2是预后差的独立危险因素。
血管内皮生长因子-c(VEGF-c)是VEGF家族的成员之一，又称为淋巴管生长因子，是目前发现的唯一特异的促淋巴管内皮生长因子，可诱导实体瘤内或瘤周的淋巴管生成，与恶性肿瘤的淋巴转移密切相关<[12-13]>。Kirkpat rick等<[10]>发现PGs可以诱导血管内皮生长因子(VEGF)的表达，使其mRNA水平明显增高，促进肿瘤微血管生成。流行病学及实验研究资料表明，长期坚持服用非甾体类抗炎药(NSAIDs)如阿司匹林等可减少和预防食管癌、胃癌、结肠癌的发生<[21]>，使大肠癌的危险性降低40﹪-50﹪<[22]>。NSAIDs共同的作用机制是抑制花生四烯酸(ArachidonicAcid，AA)代谢过程中的环氧化酶(Cyclooxygenase，COX)，从而减少前列腺素(Prostaglandins，PGs)的生成。COX-2作为NSAIDs的作用靶点发挥其抗肿瘤作用。
综上所述，阿司匹林是否通过对还氧化酶-2(COX-2)活性的影响、下调血管内皮生长因子-c(VEGF-c)的表达对人食管鳞癌细胞(ECa-109)增殖和转移具有抑制作用是本课题研究目的之所在。
方法：
1、应用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定阿司匹林对人食管鳞癌细胞(ECa-109)增殖的抑制作用，同时观察是否存在剂量和时间依赖性。
2、通过流式细胞仪分析细胞周期，观察阿司匹林对人食管鳞癌细胞(ECa-109)细胞周期的影响。
3、应用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法研究阿司匹林对人食管鳞癌细胞(ECa-109)COX-2mRNA、VEGFmRNA表达的影响。
4、应用Western-Blot法研究阿司匹林对人食管鳞癌细胞(ECa-109)COX-2、VEGF-c表达的影响。
结果:
1、在100μg/ml浓度时阿司匹林作用ECa-109细胞48h、72h有抑制细胞增殖的作用，最佳作用时间为48h；在200μg/ml浓度时阿司匹林作用ECa-109细胞最佳抑制时间为48-72h；在400μg/ml浓度时阿司匹林作用ECa-109细胞最佳抑制时间为72h。
2、阿司匹林(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)作用细胞48h，有显著上调ECa-109细胞周期中G<,0>/G<,1>期细胞数目，下调S期细胞数目的作用(p<0.05)。
3、对照组及阿司匹林(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理组COX-2、VEGF基因及蛋白均出现表达，且量效呈现显著的正相关性。
结论:
1、在100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml浓度范围内阿司匹林对人食管鳞癌细胞(ECa-109)的增殖有一定的抑制作用，具有剂量和时间依赖性。
2、在100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml浓度范围内，作用于食管鳞癌细胞(ECa-109)96h，阿司匹林无诱导食管鳞癌细胞凋亡的作用，提示其仅仅可延缓人食管鳞癌细胞(ECa-109)的增殖速度。
3、阿司匹林抑制人食管鳞癌细胞(ECa-109)的增殖，使食管鳞癌细胞(ECa-109)阻滞于G<,0>/G<,1>期，提示阿司匹林抑制人食管癌细胞(ECa-109)的增殖的作用不仅仅与COX-2有关，可能还有其它的抗肿瘤机制。
4、阿司匹林对食管鳞癌细胞(ECa-109)COX-2mRNA、COX-2蛋白的表达有显著的抑制作用，提示COX-2是其发挥抗肿瘤作用的重要靶点。
5、阿司匹林对食管鳞癌细胞(ECa-109)VEGFmRNA、VEGF-c蛋白表达有显著的抑制作用，提示阿司匹林具有抑制ECa-109转移的作用。
6、阿司匹林抑制ECa-109细胞VEGFmRNA、VEGF-c蛋白表达的机制可能与其下调COX-2mRNA、COX-2蛋白的表达有关，阿司匹林可能通过抑制COX-2的活性，COX-2蛋白表达的下调，进而抑制PGE<,2>下调ECa-109细胞VEGFmRNA的表达，减弱VEGF-c的正反馈调节作用，使ECa-109细胞COX-2mRNA表达下调，进一步使COX-2蛋白表达的下调，形成良性循环，发挥其抑制ECa-109细胞增殖及淋巴转移的作用。