论文部分内容阅读
纳米金具有优良的光学性能、电学性能、生物相容性以及表面易被修饰的特点,在免疫标记、疾病的诊断与治疗、药物检测等领域具有广阔的应用前景。基于纳米金的比色传感一般步骤为:建立一种纳米金反应体系,使其与靶物质特异性结合,从而发生物理、化学或者生物反应,并通过转换元件,输出电信号或者光信号,最终完成对靶物质的分析检测。 目前,有关食品安全检测的方法种类较多,传统的检测方法面临着耗时、耗力、检测成本高的难题,导致我国被检测的食品不足食品生产总量2%,检测率极低。纳米金比色方法具有高通量、简单、快速灵敏的特点,能够更适用于食品安全的现场检测。本研究从食品安全现状着手,针对日益突出的食品掺假问题进行了深入的研究工作。通过制备可控、稳定以及尺寸均一的纳米金球/棒,筛选出其中的一种纳米金颗粒作为比色检测工具,并进一步将纳米金球应用到三聚氰胺以及掺假肉的检测上。建立了无标记纳米金比色检测三聚氰胺的方法以及巯基标记纳米金检测掺假肉的方法。 (一)纳米金球/纳米金棒的制备:通过控制Na3Ct/HAuCl4的摩尔比值,制备了不同分散度、不同尺寸的纳米金球。通过控制硝酸银的用量,制得两种长径比不同的金纳米棒。将所制得的纳米金颗粒用紫外可见光谱、TEM等表征,选择一组形貌可控,稳定性良好,尺寸均一的纳米金球,供实验比色检测用。 (二)无标记纳米金比色检测三聚氰胺体系的建立:未经修饰的纳米金能够与三聚氰胺在共价配位键的作用下相互吸引,从而使得纳米金相互靠近,最终可导致彼此间距减小而发生聚沉。在此基础上,通过柠檬酸根与硫酸氢根配基的交换,减小了纳米金表面的空间位阻,并进一步优化反应温度、反应时间、pH等条件。在最佳反应条件下,反应体系检测范围为0.08~12 mg/kg,线性相关系数为0.993,检测回收率范围是84%~98%。试验操作简便,灵敏度高。当牛奶中三聚氰胺浓度超过8 mg/kg时,可用肉眼检测。 (三)巯基标记纳米金识别肉制品中的鸡源性成分:基于鸡的 D-loop基因,设计一端含巯基的鸡的特异性引物。以试样提取的基因为模板,经过 PCR后。如果试样中含有鸡源性成分,得到含巯基的 PCR产物,在一定浓度氯化钠存在的条件下,纳米金稳定存在,不会发生聚沉。反之,纳米金聚沉。结果显示,掺假肉模板中鸡源性成分最低检出限为5 ng/μL。