表面等离子体子共振生物传感技术检测生物分子的研究

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表面等离子体子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)技术对于生物分子相互作用分析来说是最有效的方法之一,尤其是它的表面敏感应答、无需标记检测和实时监测反应动态的优点,为生物分子之间相互作用的专一性、亲和性、动力学关系和分析复杂样品中目标分子等提供了丰富的信息。本文通过文献综述和实验研究两个方面阐述了SPR传感器的原理和应用,并建立了三种SPR传感器检测不同类型生物分子的灵敏分析方法。本论文文献综述部分详细阐述了SPR的原理及研究背景和意义,并且对SPR的原理、传感器类型、应用及最新进展进行了综述。本论文实验研究部分共包括三个主要内容:1、在SPR传感器上建立小分子物质—青霉素的检测方法。利用波长检测型SPR生物传感器检测青霉素,其主要原理依据是:青霉素属于β-内酰胺环类抗生素,在强酸环境下分解产生青霉胺,然后引入胶体金与青霉胺结合,既可以增加青霉胺的质量也可增强SPR生物传感器的共振信号,实现灵敏检测。由于SPR传感器检测小分子物质具有一定的挑战性,而本方法对于部分小分子物质具有有效的检测能力;2、利用SPR传感器研究凋亡酶caspase-3的碱基差异变化,使用波长检测型SPR生物传感器应用到凋亡酶caspase-3DNA寡核苷酸片段的碱基错配研究。为了增强检测灵敏度,Taq DNA聚合酶被用来作为信号放大的工具。Taq DNA聚合酶在聚合酶链式反应中用来与DNA模板—引物复合物结合,最后实现链的延伸,而在SPR生物传感器检测过程中,可用它来鉴别寡核苷酸链的差异。本研究不仅优化酶的反应条件提高了检测的灵敏度,同时也是对固相表面的酶反应条件做相应的摸索;3、在SPR传感器上检测肝癌细胞HepG2。采用SPR成像装置与微流控芯片相结合,建立了有效地捕获肝癌细胞HepG2并检测其浓度的方法。检测过程中,利用癌胚抗原抗体来捕获HepG2,为了使癌胚抗原抗体的抗原结合位点充分暴露出来,引入蛋白A(Protein A)来连接抗体重链。有效地捕获癌细胞并检测其浓度或者数目,对于抗癌药物研究和癌症的预防和诊断都具有重要意义。
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