三种杨树NHX1和SOS1基因及其启动子功能研究

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以胡杨(Populus euphratica)、俄罗斯杨(P.russkii)和新疆杨(P.bollena)为实验材料,研究了盐胁迫下相关基因的表达;克隆了胡杨的NHX1和SOS1基因,构建酵母表达载体,对其功能进行了初步分析;并克隆了胡杨的NHX1和SOS1基因的启动子及俄罗斯杨和新疆杨SOS1基因的启动子,并将其转入俄罗斯杨中,以期进一步揭示NHX1和SOS1基因在杨树Na+转运调控中的作用,对研究杨树Na+的分配和抗盐性都具有重要意义。为今后作物耐盐育种提供方法指导与理论支持。主要结论如下:(1)通过荧光定量PCR分析了盐胁迫下相关基因的表达量的差异。其中胡杨的NHX1表达量下降,而SOS1基因的表达量上升至原来的将近3倍。整体来说,当发生盐胁迫时,俄罗斯杨盐胁迫相关基因的表达量变化幅度并不明显。HKT1-1和HKT1-2的表达量表现出先上升后下降的趋势,HKT1-1和HKT1-2短时间内表达量的提高可以为植物能够适应长期胁迫提供信号,促使植物来合成其它的渗透调节物质。(2)克隆了胡杨NHX1和SOS1基因,对其跨膜结构域进行分析后发现NHX1蛋白有10个跨膜结构域,SOS1蛋白有12个跨膜结构域。将两个基因双酶切后连接酵母表达载体p YES2,并转化盐敏感型酵母G19,异源表达胡杨NHX1和SOS1基因,以期对NHX1和SOS1基因功能进行验证。但Pe NHX1和Pe SOS1不能完全代替酵母Sc NHX1蛋白的功能。(3)克隆了胡杨的NHX1和SOS1基因的启动子及俄罗斯杨和新疆杨SOS1基因的启动子。对其进行生物学信息分析,表明它们在序列上的差异比较明显。并且启动子中顺式作用元件的数量和位置也有一定的差异。但均具有与盐胁迫诱导有关作用元件GT1-motif。(4)构建了启动子::GUS基因表达载体Pe NHX1Pro::GUS、Pe SOS1Pro::GUS、Pr SOS1Pro::GUS和Pb SOS1Pro::GUS并将其转入俄罗斯杨。以俄罗斯杨叶片为外植体诱导愈伤组织,优化继代与分化的条件,获得了俄罗斯杨的再生植株。
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