目的:VacA是幽门螺杆菌重要的毒力因子之一,本团队已经进行的部分细胞实验表明其能够通过介导细胞外钙内流促进重要骨架结合蛋白ezrin的降解,进而影响ACAP4和质子泵在胃壁细胞膜上的定位,导致胃酸分泌能力的下调。为了验证这一结论的正确性以及进一步揭示ACAP4-ezrin信号通路在胃酸分泌功能中的作用,我们将研究思路由细胞学水平延伸至整体动物水平,利用ACAP4壁细胞特异性敲除小鼠研究了 HP VacA对胃酸分泌的影响并探讨其机制。同时我们对临床慢性胃炎患者进行了证候学调查,分析了慢性胃炎病理演变过程中证候的变化趋势,并利用从临床取得的患者胃黏膜组织探讨了 ACAP4-ezrin、质子泵表达与疾病病理演变以及证候分布特点和演变趋势之间的相关性。方法:本研究分为实验研究和临床研究两部分。第一部分为实验研究,本部分研究利用幽门螺杆菌VacA毒素对ACAP4基因剔除小鼠的胃酸分泌能力、胃粘膜对VacA易感性、VacA对ACAP4-ezrin及质子泵表达等的影响进行了研究,探讨了 ACAP4-ezrin在胃酸分泌当中的重要作用以及VacA对该通路的影响。第二部分为临床研究,本研究共收集了 300例慢性胃炎患者的四诊信息及其中59例患者的胃黏膜标本,运用描述性分析、因子分析等探讨慢性胃炎患者的证候特点及随着病理演变过程而出现的证候演变趋势,并结合免疫组化等研究方法,探索了 ACAP4-ezrin、质子泵等的表达与疾病的病理演变、证候演变的相关性。结果:①ACAP4KO小鼠生理状态下胃酸分泌能力降低,VacA能够抑制野生型小鼠的胃酸分泌功能,而对ACAP4 KO小鼠的酸分泌功能则基本无影响,同时ACAP4KO小鼠胃泌素介导的胃酸分泌水平出现代偿性升高;②野生型小鼠粘膜厚度变化以及腺体结构松散程度均较ACAP4 KO小鼠的损害较轻;给予VacA灌胃的ACAP4KO小鼠出现粘膜结构紊乱,局部出血等病理损害的几率明显高于野生型小鼠,并且上皮细胞出现空泡化的几率要明显高于野生型小鼠;③VacA还能够明显的减弱正常小鼠胃粘膜ACAP4、ezrin、质子泵的表达;④非萎缩性胃炎患者的证候类型以实证居多,萎缩性胃炎则以虚实夹杂证居多,癌前病变患者则以虚证居多,三者证候类型之间呈现了实证→虚实夹杂证→虚证的演变趋势;⑤ACAP4-ezrin及质子泵的表达与HP感染存在着明显的相关性,但ACAP4-ezrin及质子泵的表达与慢性胃炎患者的证候分布及其演变趋势之间暂未发现明显的相关性。结论:①ACAP4-ezrin在壁细胞胃酸分泌过程中承担着重要的作用,ACAP4-ezrin介导的胃酸分泌可以因为ACAP4的敲除而被阻断;②VacA破坏ezrin在壁细胞顶膜的定位及ACAP4-ezrin的相互作用在整体动物水平依然具有导致胃酸分泌减少的重要作用。但实验结果同时也提示,除了 ACAP4-ezrin介导的胃酸分泌途径外,依然存在着其他的介导胃酸分泌的途径或者通路,当ACAP4-ezrin的相互作用被阻断时,这些通路可能能够起到代偿的作用;③ACAP4基因敲除后,小鼠胃粘膜对VacA导致的粘膜损伤的易感性增加,提示ACAP4-ezrin可能是HP VacA作用于胃粘膜上皮细胞导致出现生理功能紊乱和病理损害的重要作用靶点之一;④实验研究和临床研究的结果表明,HP感染过程中分泌的VacA能够作用于ACAP4-ezrin复合体,通过破坏ezrin结构、ACAP4-ezrin相互作用以及抑制H,KATPase表达等多种方式抑制胃酸的分泌,这可能是HP感染的患者出现胃酸分泌过少的重要机制之一;⑤在慢性胃炎的病理演变过程中ACAP4、ezrin以及质子泵的表达随着胃粘膜结构破坏的加重逐渐减弱,部分统计学结果说明ACAP4、ezrin和质子泵的表达与慢性胃炎病情程度之间具有一定的相关性。因而ACAP4-ezrin以及质子泵不仅在胃粘膜壁细胞中正常的表达是决定胃酸分泌正常与否的重要指标,同时也有可能是提示胃粘膜病变严重程度的重要指标;⑥非萎缩性胃炎患者临床证候类型以实证居多,萎缩性胃炎则以虚实夹杂证居多,癌前病变患者则以虚证居多,三者证候之间呈现了实证→虚实夹杂证→虚证的演变趋势;⑦ACAP4-ezrin及质子泵的表达与HP感染存在着明显的相关性,但并不是绝对的负相关关系;而ACAP4-ezrin及质子泵的表达与慢性胃炎患者的证候分布及其演变趋势之间暂未发现明显的相关性。