利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列),将扩增的两片段依次插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建成重组质粒pET-E2和pET-2E2,将两质粒转化受体菌BL21(DE3),对转化重组菌用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行了优化,使目的蛋白得到高效表达。 应用His-bind树脂层析柱纯化重组2E2蛋白,纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定其纯化效果,并用Western-blot检验其特异性。在此基础上,利用重组2E2蛋白作包被抗原,优化反应条件后,建立了检测抗猪瘟病毒血清抗体的重组2E2蛋白—ELISA方法,应用该方法和间接血凝检测试剂盒对收集的120份血清进行检测,结果显示,间接ELISA方法与间接血凝检测方法相比具有更好的表现力。 本研究以猪IgG基因为模板,设计了一对引物,并应用PCR方法扩增出其中重链恒定区部分基因序列。将其克隆入pET-2E2中,构建成pET-2E2-scIgG重组质粒并对其进行诱导表达。取经纯化过的E2,2E2和2E2-scIgG重组蛋白分别免疫小白鼠,结果表明,三种蛋白均可刺激机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答,2E2-scIgG蛋白的免疫效果明显优于另两种蛋白,并且在所选的抗原区域可能存在一个或多个T细胞表位。