目的：严重烧伤对机体是一个强烈的刺激，可以引起包括肠粘膜损害的全身反应，肠道屏障障碍引起细菌移位，形成内源性感染，进一步可造成远位器官功能的损害。细菌移位的途径有淋巴途径、血液途径、跨肠壁途径。可以把细菌移位的过程分为三个阶段：1．肠壁屏障(粘膜上皮及肠相关淋巴组织)2．肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node,MLN)／肝脏3．血液循环及远位脏器。第二阶段是内源性感染能否发生的关键一环，其免疫状态对是否造成全身感染具有重要的意义。以往大多数实验主要针对血液循环或者各个脏器来研究细菌移位对机体的影响，而直接对淋巴途径研究的报道相对较少。由于淋巴管解剖操作难度较大，以往对淋巴的研究主要集中于较粗的胸导管，而直接研究肠淋巴的甚少。胸导管收集了肠干、腰干的淋巴，其变化不能为肠源性感染提供直接的证据，这可能是造成许多研究具有争议和矛盾的原因之一。本实验拟通过对MLN及肠淋巴(mesenteric lymph fluid，MLF)的细菌／内毒素、炎症介质及免疫状态的检测，与肝脏及肝后水平进行比较，确定肠淋巴(mesenteric lymph，ML)在细菌移位时的状态和作用。主要研究内容：本研究拟寻找建立理想淋巴管瘘动物模型的方法，研究MLF的动态变化，比较严重烧伤大鼠MLF和肝静脉细菌、内毒素的变化特点：比较MLN、MLF、肝脏、血液内炎症介质(致炎因子IL-18，抗炎因子IL-10、晚期炎症介质高迁移率族蛋白(High mobility group box-1 protein,HMGB-1))的变化，MLNT细胞亚群CD4+、CD8+比例及CD4+／CD8+的变化，研究肠淋巴与细菌移位、肠源性感染的关系。方法：实验动物：成年雄性Wistar大鼠。利用显微外科技术采用不同的手术入路建立淋巴管瘘模型，引流淋巴液，采集淋巴液标本；下腔静脉插管，并使管道末端朝向肝静脉，采集以肝静脉血为主的血液标本；将动物随机分为两组：烫伤组(Scald)、假烫伤组(Sham)。致伤后2小时、24小时、72小时采集标本：MLF、血液，MLN，肝脏，采集标本在4℃冰生理盐水中漂洗污血。利用CM—Dil标记法和细菌培养法，分别检测总细菌和活菌移位情况；利用定量显色基质鳖试验法测量内毒素的水平，观察严重烧伤后细菌移位的变化特点。分离留取血清、淋巴液，将组织匀浆，离心，应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清、组织内IL-18，IL-10水平，用Western Blotting法检测HMGB-1水平，观察炎症介质的变化规律。电镜观察肠系膜淋巴结的超微结构和凋亡情况，流式细胞仪FITC-AnnexinV／PI双染法检测严重烧伤大鼠的淋巴结细胞凋亡。流式细胞术检测CD4+、CD8+、CD4+／CD8+，观察严重烧伤对肠道引流淋巴结免疫状态的影响。用Spss for windows 13.0处理实验数据，所有结果以((?)±s)表示。结果：1．利用显微外科技术插管成功率82.5％，正中切口和斜切口对制作肠淋巴瘘模型制没有显著差异，斜切口可以大大缩短胸导管淋巴瘘的操作时间；24小时内，肠系膜淋巴每小时平均流量两种方法没有显著差异。2．在烧伤大鼠的各个标本中都检测到了荧光标记细菌，伤后2小时，各个组织内的细菌开始明显增高，伤后24小时达到高峰，伤后72小时开始下降，但是活菌检出率增高。肝脏、肠系膜淋巴结、淋巴内的内毒素伤后2小时就达到高峰，肝组织内毒素浓度相对较高，血液内毒素水平升高没有组织内毒素的剧烈。淋巴内毒素的浓度远远高于血液的含量，最高10余倍。但是淋巴管的携带量0.029±0.010Eu／min,小于血液的携带量0.815±0.295Eu／min(p＜0.05)。3．炎症介质的变化：烧伤组后IL—18水平从伤后2小时即开始明显升高(p＜0.05)，在24小时达到高峰，MLNs的IL-18水平(57.87±1.12pg/ml)显著高于肝的(52.42±0.95pg/ml)(p＜0.05)。72小时开始下降，但是肝脏下降幅度比较小，仍处于较高水平。烧伤后IL—10水平开始略有升高(p＞0.05)，伤后24达到高峰，伤后72小时略有下降，肝脏从24小时到72小时都维持在一个比较高的水平(p＜0.05)。伤后24小时淋巴液内IL—10的水平(16.20±1.93pg／ml)高于血液内的(14.90±2.02pg/ml)(p＞0.05)。伤后72小时IL-18／IL-10显著降低。伤后24～72小时HMGB-1开始表达，并维持在较高水平，血液的HMGB-1水平比较低。MLN的表达量最高，略高于肝脏(p＞0.05)。3．肠系膜淋巴的凋亡情况：假烫伤组凋亡率为8.6±0.57％，烧伤组伤后2小时为16.5±0.75％，24小时组为23.0±0.57％，72小时为27.5±1.02％。统计结果表明，严重烧伤后2h，24小时，72小时的肠系膜淋巴结的细胞凋亡率均升高，与假烫伤组比较有显著差异(p＜0.05)。4．淋巴结CD4+、CD8+T淋巴细胞比例和CD4+／CD8+比值变化：严重烧伤后CD4+的比例明显下降，伤后72小时最低(49.8±0.84％)。各组CD8+的比例在伤后2、24和72小时，都有不同程度的升高(p＜0.05)。各组CD4+／CD8+比值比都有明显下降，烧伤组伤后72小时最低1.96±0.04。结论：1．利用显微外科技术采用斜切口是制作淋巴瘘模型的理想方法，手术入路对肠淋巴瘘的制作没有显著影响2．CM-Dil标记细菌能够比较全面的反映细菌移位的情况，绝大多数移位的细菌能够被肠系膜淋巴结等免疫器官杀死。淋巴液内细菌、内毒素的水平比肝静脉血的高，但是携带量比肝静脉血的低，因此淋巴途径是细菌移位的重要途径。3．烧伤后高浓度的微生物、内毒素移位到MLN刺激MLN内的淋巴细胞，分泌了较多的IL—18、IL—10、HMGB1，IL—18在肠淋巴的早期炎症反应中起重要作用，而HMGB维持和延续了炎症反应，晚期IL—18／IL—10明显下降，提示Th1／Th2平衡处于Th2状态。4．严重烧伤后大鼠肠系膜淋巴结细胞发生凋亡，T细胞亚群伤后72小时CD4+／CD8+明显下降，肠淋巴局部免疫紊乱，处于免疫抑制状态。