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随着生命科学的快速发展，对生命体中发挥重要作用的生物分子进行分析检测有重要意义，尤其在疾病的早期诊断，预防，治疗等方面。生物传感技术作为分析化学学科中的一种前沿的新型分析技术，具有灵敏度高、选择性好、成本较低、分析速度快以及能够进行连续监测等优点，在生命科学，临床医学，分子生物学等领域得到广泛的应用。随着生物化学的进一步发展，DNA不再仅仅作为生物体遗传信息的携带者而被熟知，它的更多化学及生物电子学性质被更加广泛和深入地研究，如今DNA已发展成为了新型感应材料，催化剂，药物等。本研究论文综合文献报道，利用酶信号放大技术，结合DNA的生物识别和催化功能，致力于提高检测灵敏度，线性响应范围，简化实验过程，控制实验成本等几方面，发展了几种新型的无标记DNA传感方法，对几种重要的生物分子进行了特异性好，灵敏度高的分析检测，工作主要内容如下：(1)构建了一种基于PCR核酸扩增，甲基化敏感的限制性内切酶酶切和编码蛋白DNA的体外表达的新型传感策略，实现了对DNA甲基转移酶的灵敏检测，检测下限达0.08U/mL，化学发光强度与0.2U/mL-100U/mL的DNA甲基转移酶间存在线性关系。该方法特点在于通过PCR扩增获得的无标记的线性双链DNA，既是DNA甲基转移酶和甲基化敏感的限制性内切酶的识别和作用底物，同时由于其具有启动子序列和荧光素酶编码序列，也是体外表达荧光素酶的模板。只有在甲基化位点保持完整的情况下，模板DNA才能顺利进行体外的转录/翻译过程，表达产物荧光素酶催化荧光素氧化发光。（第二章）(2)基于5’端磷酸化的双链DNA能被Lamda核酸外切酶优先识别并酶切，设计了一个简单的无标记的发夹DNA探针作为反应平台，实现了对T4多聚核苷酸激酶(T4Polynucleotide Kinase,T4PNK)的检测。通过PNK和lamda核酸外切酶的共同作用实现对发夹探针中DNAzyme的调控，并利用释放的DNAzyme与氯化高铁血红素(Hemin)结合催化2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS2-)的显色反应，实现了对PNK的简单，快速，可视化的灵敏检测，并对其抑制剂的筛选进行了相应考查。该分析方法对PNK的检测下限达0.06U/mL，在0.06-100U/mL之间，紫外-可见吸收光强度的增值与PNK浓度的对数呈线性相关。（第三章）(3)利用等温循环链置换反应，对目标分子和信号分子进行同步放大，实现了对MicroRNA的简单检测，检测下限达0.5fM，在0.5fM-1nM的目标物间，紫外-可见吸光强度与目标物浓度的对数呈现出线性相关。基于DNA探针在目标物的存在下发生构象改变，设计了一个无任何标记的DNA发夹探针，该探针被目标物打开后作为循环链置换反应的模板。核酸切刻内切酶在探针的两个切刻位点处进行切刻，产生一种核酸片段作为目标类似物继续打开其他探针，另一种核酸片段作为信号分子随反应累积，与Hemin形成复合物，ABTS2-氧化得到绿色产物，通过测定吸收光谱对目标分子进行定量分析。（第四章）