套细胞淋巴瘤形态学、免疫表型和遗传学特征及其诊断价值的研究研究生：水若鸿导 师：朱雄增教授目的：研究套细胞淋巴瘤形态学、免疫表型和遗传学特征，并探讨其对套细胞淋巴瘤的诊断价值。方法：对41例套细胞淋巴瘤和91例对照组其它小B细胞恶性淋巴瘤石蜡包埋组织进行了形态学观察和cyclin D1、CD5、CD10和CD23等抗体的免疫组织化学染色；采用半嵌套式PCR及DNA测序技术对这些肿瘤和20例淋巴结反应性增生病例石蜡包埋组织中t（11；14）形成的bcl-1/JH重组基因进行了扩增和序列测定，以看家基因β-Actin作为内对照检测DNA质量；采用RT-PCR和竞争性RT-PCR（competitive RT-PCR）方法对其中38例结内套细胞淋巴瘤和58例结内其它小B细胞恶性淋巴瘤及20例淋巴结反应性增生病例石蜡包埋组织中cyclin D1 mRNA的表达进行了检测，以看家基因PGK作为内对照检测RNA质量。结果：（1）采用免疫组织化学技术，套细胞淋巴瘤和对照组小B细胞恶性淋巴瘤CD45、CD20阳性率均为100%。套细胞淋巴瘤cyclin D1阳性率为70.7%（29/41），CD5阳性率为73.2%（30/41），CD10和CD23标记均为阴性，bcl-2阳性率为92.7%（38/41）。Cyclin D1在对照组小B细胞恶性淋巴瘤中均为阴性。对照组中B-SLL中CD5 86.7%（13/15）阳性，CD23 80.0%（12/15）阳性，bcl-2 93.3%（14/15）阳性；FL中CD10 86.1%（31/36）阳性，bcl-2 100%（36/36）阳性；MZL中bcl-2 42.9%（3/7）阳性；MALT-L中bcl-2 66.7%（20/30）阳性。（2）采用半嵌套式PCR技术，41例套细胞淋巴瘤中25例检出bcl-1/JH基因组DNA。去除β-Actin 基因DNA和bcl-1/JH基因组DNA均阴性的病例3例，套细胞淋巴瘤中bcl-1/JH基因组DNA的检出率为65.8%（25/38）。PCR结果全部经测序证实，11q13上的断裂点均在bcl-1基因MTC区中SstⅠ限制性酶切位点上、下游50个核苷酸内。对照组小B细胞恶性淋巴瘤和淋巴结反应性增生中均未检出bcl-1/JH基因组DNA。（3）采用RT-PCR技术，38例结内套细胞淋巴瘤中，34例可检出cyclin D1 mRNA表达，去除PGK和cyclin D1 mRNA均阴性的病例2<WP=4>例，套细胞淋巴瘤中cyclin D1 mRNA表达的阳性率为94.4%（34/36）。对照组中B-SLL 有1例检出cyclin D1 mRNA表达，其余对照组病例均未检出cyclin D1 mRNA表达。PCR结果全部经测序证实。（4）采用竞争性RT-PCR技术，38例结内套细胞淋巴瘤中，27例可检出cyclin D1 mRNA高表达，去除2例PGK也为阴性的病例，套细胞淋巴瘤中cyclin D1 mRNA高表达率为75.0%（27/36）。对照组小B细胞恶性淋巴瘤及淋巴结反应性增生无一例有cyclin D1 mRNA高表达。结论：（1）套细胞淋巴瘤与对照组其它小B细胞恶性淋巴瘤在组织结构和组成细胞上各具形态学特征，可用于诊断和鉴别诊断。（2）套细胞淋巴瘤与对照组其它小B细胞恶性淋巴瘤各具免疫表型特征，石蜡包埋组织中cyclin D1、CD5、CD10和CD23等抗体的检测有助于正确的诊断和鉴别诊断。cyclin D1是套细胞淋巴瘤最特异性的免疫组化标记。（3）半嵌套式PCR技术在套细胞淋巴瘤石蜡包埋组织中检测t（11；14）所形成的bcl-1/JH重组基因组DNA片段特异性高，有一定的敏感性，可用于套细胞淋巴瘤病理诊断。（4）RT-PCR方法和竞争性RT-PCR方法可在石蜡包埋组织中检测cyclin D1 mRNA 的表达，前者敏感性高，特异性稍低；后者特异性高，敏感性稍低，均可用于套细胞淋巴瘤的诊断和鉴别诊断。（5）形态学、免疫组织化学和分子生物学方法（半嵌套式PCR、RT-PCR、竞争性RT-PCR）的综合应用有利于套细胞淋巴瘤的正确诊断和鉴别诊断