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目的细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)是诱发根尖周炎的强烈毒力因子。在坏死牙髓组织中可以检测到LPS,细菌产生的LPS具有很强的渗透性,容易经过根尖孔渗透进入根尖周组织从而导致根尖周发生病变。在年轻恒牙中,因畸形、龋坏、外伤等因素导致的牙髓根尖周病变,细菌及其内毒素LPS会接触刺激根尖乳头组织中的人根尖乳头细胞(human dental apical papilla cells, HAPCs),该细胞生物学行为不可避免地受到炎性因子LPS的影响。本研究意在探究LPS对人根尖乳头细胞增殖及分化的影响及MAPKs信号通路在LPS调控的人根尖乳头细胞分化过程中的作用。方法与结果第一部分:人根尖乳头细胞分离培养及诱导矿化酶消化法分离培养人根尖乳头细胞,细胞的增殖能力强,生长曲线呈S形。矿化诱导21d,同对照组相比,矿化诱导组茜素红染色呈红褐色,镜下见矿化结节多且深染。第二部分:LPS对人根尖乳头细胞增殖及成牙本质/成骨向分化的影响采用不同浓度的LPS作用于人根尖乳头细胞,分别应用MTT法和碱性磷酸酶试剂盒检测LPS对人根尖乳头细胞增殖及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性的影响;结果显示低浓度的LPS对细胞增殖及ALP活性均有促进作用。进一步用低浓度LPS作用于细胞,茜素红染色观察矿化结节的形成,real-time PCR检测矿化相关标记物牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)、成骨相关性转录因子(runt-related transcription factor2, Runx2)、骨涎蛋白(bone sialoprotein, BSP)、骨钙素(osteocalcin, OCN)基因水平的表达。结果显示LPS作用于细胞7d后矿化结节的形成与对照组相比无差异;矿化相关标记物DSPP、BSP、Runx2的表达上调且差异具有统计学意义,OCN表达未上调。14d后LPS刺激组矿化结节形成增多,与对照组相比差异具有统计学意义;矿化相关标记物DSPP, RUNX2、BSP、OCN均有升高,其中DSPP、RUNX2、BSP与对照组相比差异具有统计学意义。21d后LPS刺激组矿化结节的形成与对照组无差异;矿化相关标记物Runx2的表达上调且差异具有统计学意义,DSPP、BSP、OCN表达未上调。以上结果提示,低浓度的LPS很可能在人根尖乳头细胞成牙本质/成骨向分化过程中起正向调控作用。第三部分:MAPKs信号通路在LPS调控人根尖乳头细胞成牙本质/成骨向分化过程中的作用应用Western Blot检测LPS作用于人根尖乳头细胞后MAPKs信号通路蛋白磷酸化水平的变化。结果显示,LPS促进ERK和p38的磷酸化,表明LPS可以激活ERK和p38MAPK信号通路。ERK通路抑制剂U0126/p38MAPK通路抑制剂SB203580和LPS联合作用于细胞后,通过real-time PCR和Western Blot分别检测矿化相关因子DSPP、Runx2、BSP基因及蛋白水平的表达。利用碱性磷酸酶试剂盒检测ALP的活性。结果显示,抑制ERK和p38MAPK信号通路后,人根尖乳头细胞的ALP活性降低;DSPP、Runx2、BSP基因及蛋白水平的表达量均有所降低且差异具有统计学意义。以上结果表明抑制ERK和p38MAPK信号通路可降低LPS调控的人根尖乳头细胞成牙本质/成骨向分化。结论低浓度的LPS可促进人根尖乳头细胞的增殖及牙本质/成骨向分化;同时LPS能够激活人根尖乳头细胞中ERK和p38MAPK信号通路,参与LPS调控的根尖乳头细胞的成牙本质/成骨向分化过程并在其中发挥着正向调控的作用。