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研究目的陈皮为芸香科柑橘属植物橘Citrus reticulatae Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮,是一种重要的功能性药食两用的植物资源。陈皮药材主要分为“广陈皮”和“陈皮”,质量以广陈皮为优。广陈皮为茶枝柑Citrus reticulata‘Chachi’的干燥成熟果皮,主产于广东新会,是我国岭南传统著名的道地药材。陈皮气香,味辛、苦、性温,入脾经、胃经、肺经,具有理气健脾、和胃止呕、燥湿化痰等功效;临床上主要用于胸脘胀满,食少吐泻,咳嗽痰多。尽管陈皮的化学成分、药理活性及功效确切,其应用现状却十分混乱。一方面,不同品种来源陈皮之间混用情况严重,极大地影响了陈皮的实际药用价值;另一方面,人们对陈皮的认识和了解不够充分,许多可供陈皮应用的橘皮被大量丢弃,不仅浪费资源,而且带来环境污染。因此,如何建立一套完整、适当的方法,克服常规质量评价方法存在的“片面性”、“模糊性”等问题,科学分析以及有效评价不同品种来源陈皮质量（应用价值）,以利于陈皮资源的合理开发应用就显得尤为重要。鉴于此,本课题以21个品种89批不同产地的陈皮样品为对象,在建立传统止咳、化痰功效的小鼠动物模型的基础上,探究陈皮提取物的止咳化痰活性有效部位;进一步建立陈皮液相“活性”指纹图谱以及含量测定,结合LC-MS分析探明陈皮有效部位的效应物质,并对其充分解析,以求在效应成分的“数”与“量”及成分整体相似性的差异上对不同品种来源的陈皮质量（应用价值）进行全面、深入地评价,为陈皮现有质量标准完善、品种保护和资源合理开发利用提供参考依据和思路。研究方法本文分别采用浓氨水引咳小鼠和小鼠气道排泌酚红实验建立传统止咳、化痰功效的动物模型,观察陈皮甲醇提取物对小鼠的止咳、化痰效果,探究其止咳化痰传统功效的有效部位。以5个活性黄酮类成分为指标成分,包括橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、橘皮素和5-羟基-6,7,8,3′,4′-五甲氧基黄酮,采用高效液相色谱法（HPLC）,在设定好的色谱条件下构建黄酮类成分指纹图谱和同时测定5个主要的活性黄酮成分含量;色谱柱为DIKMA Diamonsil C18Column（250 mm×4.6 mm i.d.,5μm）;流动相:水（A相）:乙腈（B相）;流速:1 mL·min-1;柱温:25℃;进样量:20μL;检测波长:283及330 nm双波长检测。梯度洗脱程序:015 min,15%40%B;1535 min,40%50%B;3540 min,50%75%B;4050 min,75%85%B。同样地,采用高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱法（LC/MS-IT-TOF）技术,以相同的液相条件,飞行时间质谱采用电喷雾（ESI）离子源,在正离子模式下采集数据,质量扫描范围设置为m/z 1001000,运行时间50 min,对陈皮甲醇提取物化学成分进行了定性分析;结合二级质谱裂解碎片离子信息、精确相对分子质量、保留时间、对照品和文献资料鉴定和推测成分。以川陈皮素为对照,检测波长330 nm下采用紫外-可见分光光度法（UV）测定21个品种89批不同产地陈皮的多甲氧基黄酮类成分（polymethoxylated flavones,PMFs）总含量。研究结果1.陈皮甲醇提取物低、中、高剂量组灌胃后均能延长小鼠咳嗽潜伏期,减少3min内咳嗽次数,小鼠气管的酚红浓度增加,表明对排痰具有促进作用,尤其是广陈皮甲醇提取物高剂量组具有较好的止咳和化痰效果。2.以12批“新会陈皮”建立了参照指纹图谱,结合对照品比对法,利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”（2012年A版）,成功建立了广陈皮指纹图谱,确定了18个共有色谱峰,并进一步建立了其它20个不同品种来源陈皮药材的指纹图谱。3.对21个品种89批不同产地陈皮进行相似度评价,系统考察陈皮质量。研究结果表明12批道地药材（新会陈皮）的平均相似度为0.994,且不同产地茶枝柑具有较高的相似度,而不同品种来源药材的相似度存在一定的特征性差异。4.在所设定的LC-MS条件下,结合二级质谱裂解碎片离子信息、精确相对分子质量、保留时间、对照品和文献报道的质谱数据对陈皮甲醇提取物分析,成功从18个共有峰中分离鉴定了17个共有峰化学成分,其中包括4个二氢黄酮苷类,13个多甲氧基黄酮类成分。5.21个不同品种来源陈皮黄酮类成分含量结果可知,不同品种来源陈皮的5个活性黄酮类成分含量存在较大差异,其中除橙皮苷含量较高外,多甲氧基黄酮类成分中川陈皮素和橘皮素含量也较高,且不同品种之间含量差异较大。6.聚类分析和主成分分析结果将21个品种89批不同产地陈皮均分为四大类,且每个区的陈皮品种分布相一致。7.川陈皮素在3.0129.036μg·mL-1浓度范围内具有良好的线性关系（R2=0.9993）。平均加样回收率为102.173%,RSD值为1.424%。不同品种来源样品中多甲氧基黄酮含有量有明显差异,以茶枝柑、红橘、福橘、芦柑、南丰蜜橘、砂糖橘、皇帝柑、八月橘、瓯柑为高。研究结论本课题首先建立传统止咳化痰功效动物模型,结果表明广陈皮甲醇提取物高剂量组具有较好的止咳和化痰效果。在此基础上成功建立了21个品种89批不同产地陈皮“活性”指纹图谱,并进行了系统分析和综合评价。进一步通过系统分析不同品种来源陈皮黄酮成分之间的差异,全面反映不同品种来源陈皮的质量特性,为陈皮药材资源的合理应用提供参考依据;结果发现以橙皮苷和PMFs中含量较高且差异较大的川陈皮素和橘皮素为多指标成分进行陈皮质量综合评价更科学、全面,且传统上基本不作为陈皮用途的砂糖橘、芦柑、皇帝柑和八月橘果皮可考虑作为陈皮应用的有效品种资源;最后,此文UV法简单准确,可有效克服其他黄酮类成分的干扰,适用于陈皮中PMFs总含量的测定。