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目的:1.探讨miR-31对结肠炎的促进作用是否通过靶向SATB2。2.使用miR-31过表达的转基因小鼠,探讨miR-31促进结肠炎的分子机制。方法:1.SATB2敲低实验:将人结肠上皮细胞HCT 116分为control组、miR-31过表达组（转染miR-31 mimic,使miR-31过表达）、miR-31敲低组（转染miR-31 inhibiror,抑制miR-31的表达）、si-SATB2组（转染SATB2 siRNA,抑制SATB2的表达）。使用脂质体瞬时转染后将细胞放入CO2孵箱中,孵育72h后收取细胞。qRT-PCR检测siRNA的转染效率和最佳转染浓度;Western Blot检测4组细胞SATB2、NF-κB、COX-2、TGF-β1蛋白的表达。2.SATB2过表达实验:将人结肠上皮细胞HCT 116分为control组、pEXP-RB-Mam组（转染空载体）、pEXP-RB-Mam-SATB2组（转染SATB2过表达质粒）,待细胞贴壁后使用lip2000进行转染,转染后将细胞放入CO2孵箱中孵育,6h后进行换液,72h后收集细胞。Western Blot检测3组细胞SATB2、NF-κB、COX-2、TGF-β1蛋白的表达。3.动物实验:14只非转基因小鼠随机分为control组（n=6）、DSS组（n=8）,16只miR-31过表达的转基因小鼠随机分为miR-31过表达control组（n=8）、miR-31过表达+DSS组（n=8）。DSS组和miR-31过表达+DSS组第一周饮用1%的DSS,第二周饮用正常无菌水为一个cycle,重复两个半cycle造模结束。留取小鼠结肠组织,Western Blot检测小鼠结肠组织SATB2、TLR4、NF-κB、COX-2、TNF-α、iNOS、Bax、Bcl-2蛋白的表达;免疫组织化学法（Immunohistochemistry,IHC）检测小鼠结肠组织SATB2、TLR4、NF-κB、COX-2、TNF-α、Bax、Bcl-2蛋白的表达;原位末端转移酶标记法（TUNEL）检测小鼠结肠组织细胞凋亡。结果:1.siRNA的转染效率和最佳转染浓度:qRT-PCR结果显示,HCT 116细胞转染SATB2 siRNA后,SATB2的表达显著下降（P<0.01）,证明SATB2 siRNA转染有效。同时,siRNA浓度为3nM时,SATB2的表达量已有显著降低,当siRNA浓度升为5nM时,SATB2的表达量相比3nM也显著降低,并且低于10nM的siRNA,因此我们将5nM作为后续转染SATB2 siRNA的最佳浓度。2.SATB2蛋白表达结果:Western Blot结果显示,对HCT 116细胞进行转染后,与control组相比,mimic组和si-SATB2组SATB2蛋白表达水平显著下降（P<0.01）,inhibitor组SATB2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,进一步证明了转染成功。3.炎性因子NF-κB、COX-2、TGF-β1蛋白的表达结果:Western Blot结果显示,与control组相比,mimic组NF-κB、COX-2蛋白表达显著升高（P<0.05）,TGF-β1蛋白表达显著降低（P<0.01）,inhibitor组NF-κB、COX-2蛋白表达显著降低（P<0.01）,si-SATB2组NF-κB、COX-2蛋白表达显著升高（P<0.01）,TGF-β1蛋白表达显著降低（P<0.01）。4.SATB2过表达质粒的转染效率:Western Blot结果显示,对HCT 116细胞转染SATB2过表达质粒后,pEXP-RB-Mam组与control组相比,SATB2蛋白表达水平无显著差异,pEXP-RB-Mam-SATB2组SATB2蛋白表达水平较control组显著升高（P<0.01）。证明SATB2过表达质粒转染有效。5.SATB2过表达后NF-κB、COX-2、TGF-β1蛋白的表达结果:Western Blot结果显示,pEXP-RB-Mam组NF-κB、COX-2、TGF-β1蛋白表达水平相比control组无显著差异,pEXP-RB-Mam-SATB2组与control组相比,NF-κB（P<0.01）、COX-2（P<0.05）蛋白表达水平显著降低,TGF-β1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。6.小鼠结肠组织SATB2蛋白的表达:Western Blot结果显示,与control组相比,DSS组（P<0.01）和miR-31过表达组（P<0.05）SATB2蛋白表达水平均显著下降,同时与DSS组相比,miR-31+DSS组SATB2蛋白表达水平也显著下降。7.Western Blot检测小鼠结肠组织TLR4、NF-κB、iNOS、TNF-α蛋白的表达:结果显示,与control组相比,DSS组TLR4、NF-κB、iNOS、TNF-α蛋白的表达显著升高（P<0.01）,miR-31过表达组TLR4（P<0.05）、NF-κB（P<0.05）、iNOS（P<0.01）蛋白的表达也显著升高,同时与DSS组相比,miR-31+DSS组TLR4、NF-κB、iNOS、TNF-α蛋白表达水平也显著升高（P<0.01）。8.IHC检测小鼠结肠组织TLR4、NF-κB、COX-2、TNF-α蛋白的表达:结果显示,与control组相比,DSS组TLR4、NF-κB、COX-2、TNF-α蛋白的表达显著升高（P<0.01）,miR-31过表达组TLR4（P<0.01）、NF-κB（P<0.01）、COX-2（P<0.05）、TNF-α（P<0.01）蛋白的表达也显著升高,同时与DSS组相比,miR-31+DSS组TLR4、NF-κB、COX-2、TNF-α蛋白表达水平也显著升高（P<0.01）。9.TUNEL法检测小鼠结肠组织细胞凋亡结果:结果显示,与control组相比,DSS组和miR-31过表达组凋亡细胞均显著增加（P<0.01）,同时与DSS组相比,miR-31+DSS组凋亡细胞也显著增加（P<0.01）。10.Western Blot检测小鼠结肠组织Bax、Bcl-2蛋白的表达:结果显示,与control组相比,DSS组Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白蛋白表达水平下降（P<0.01）,Bcl-2/Bax比值下降（P<0.01）,miR-31过表达组Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）,Bcl-2/Bax比值下降（P<0.01）,同时与DSS组相比,miR-31+DSS组Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白蛋白表达水平下降（P<0.01）,Bcl-2/Bax比值下降（P<0.01）。11.IHC检测小鼠结肠组织Bax、Bcl-2蛋白的表达:结果显示,与control组相比,DSS组Bax蛋白表达水平升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白蛋白表达水平下降（P<0.01）,miR-31过表达组Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.01）,同时与DSS组相比,miR-31+DSS组Bax蛋白表达水平升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白蛋白表达水平下降（P<0.01）。结论:1.miR-31可通过靶向SATB2来发挥对结肠炎的促进作用。2.miR-31通过促进TLR4/NF-κB信号通路来介导肠上皮细胞凋亡促进结肠炎的发展。