【摘 要】
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胰腺癌中存在生长因子TGFα、EGF及其受体EGFR所形成的自分泌环。近来研究发现，TGFα而非EGF，与EGFR形成的自分泌环在胰腺癌细胞生长过程中起着重要的作用。我科自建的5株人胰
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胰腺癌中存在生长因子TGFα、EGF及其受体EGFR所形成的自分泌环。近来研究发现，TGFα而非EGF，与EGFR形成的自分泌环在胰腺癌细胞生长过程中起着重要的作用。我科自建的5株人胰腺癌细胞系有TGFα、EGF及EGFR表达，我们以往研究发现反义EGFR能有效她抑制胰腺癌细胞系PC-7细胞的生长，但反义EGF的抑制作用则很弱。本研究的目的是观察EGFR另一个配体TGFα在自分泌一旁分泌中的作用。研究的技术路线是通过基因转移技术将反义TGFα单独导入胰腺癌细胞以及将反义TGFα和反义EGFR双重导入胰腺癌细胞，阻断TGFα-EGFR自泌环的作用，观察其对胰腺癌PC-7细胞生长的影响和恶性表型逆转的作用。 由于生长因子刺激增殖的作用是通过细胞周期实现的，调控细胞周期进程的关键性因子为G1期的周期蛋白，而G1期重要的细胞周期蛋白cyclin D1是生长因子感受器。为研究阻断TGFα-EGFR自泌环对胰腺癌细胞生长的影响是否是通过cyclin D1的表达下调而实现，我们又构建了反义cyclin D1表达载体，导入胰腺癌细胞内，直接抑制调节细胞周期的靶基因cyclin D1的表达，观察其对胰腺癌细胞生长及对凋亡诱导的作用。 本研究内容共分三部分： 一．表达反义TGFα的重组逆转录病毒载体转染胰腺癌PC-7细胞： 利用DNA重组技术，构建表达反义TGFα的逆转录病毒载体pBabe-AS-TGFα，经逆转录病毒单向性包装细胞Ψ-2及双向性包装细胞PA317包装后，病毒上清感染PC-7细胞，经puromycin筛选，得到稳定的转化细胞系 PC-7／AS—TGFα。对转化细胞系采用Southern blot、Northern blot及Western blot杂交分析，证实有稳定的外源基因的整合及表达，而内源性TGFα的表达及合成均
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