糜烂型口腔扁平苔藓差异表达MicroRNAs的筛选

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目的:应用基因芯片方法筛选糜烂型口腔扁平苔藓(erosion oral lichen plauns,EOLP)病损部位黏膜组织差异表达的MicroRNAs并预测其相关靶基因。探究MicroRNAs参与糜烂型口腔扁平苔藓进展中的意义,为研究其相关分子调控机制奠定基础,进一步揭示糜烂型口腔扁平苔藓的发病机制并为将新的诊断标记及治疗靶点应用于临床做准备。方法:临床采集3例糜烂型OLP患者病损处黏膜组织为实验组,每例组织均分为2份,一份组织进行组织病理学检测,一份组织经RANlater(?)浸泡并在4℃条件下孵育过夜后转入-80℃冰箱冰冻保存;滨州医学院附属医院口腔颌面外科3例阻生齿拔除术中切下的多余牙龈组织为对照组。分别对其提取总RNA,测定RNA是否降解、RNA浓度及其完整性后,用Cyanine 3-pCp标记,标准条件下将标记好的探针在Agilent微阵列上杂交,Agilent微阵列扫描仪扫描芯片,使用Agilent Feature Extraction软件分析数据,筛选出具有统计学意义的差异表达的miRNAs。采用miRNAs生物信息学技术预测差异表达明显的miRNAs的靶基因。结果:1.糜烂型OLP和正常口腔黏膜组织中提取的总RNA均符合芯片杂交要求,RNA完整性评分为1.8~2.0。2.基因芯片筛选共获得159个差异表达2倍以上并与糜烂型OLP相关的miRNAs,其中12个miRNAs表达上调,147个miRNAs表达下调。差异表达4倍以上的miRNAs有18个,表达上调的有6个,表达下调的有12个。3.经过基因芯片筛选得到的miR-206和miR-133b由生物信息学分析得出:miR-206的预测靶基因中5个与糜烂型OLP相关;miR-133b的预测靶基因中1个与糜烂型OLP相关。结论:1.通过筛选最终得出18个差异表达4倍以上的miRNAs,表达上调的有6个,表达下调的有12个,可能与糜烂型口腔扁平苔藓相关。其发展机制有待进一步验证。2.在18个差异表达的miRNAs中,miR-206、miR-133b与多种癌性疾病的发生和发展过程相关,miR-206的预测靶基因STC2、ANXA2及miR-133b的预测靶基因TAGLN2与口腔鳞状细胞癌的发生密切相关。提示miR-206、miR-133b可能作为评价糜烂型OLP恶性转归的潜在生物标志物。
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