论文部分内容阅读
两个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系连锁分析 目的：利用连锁分析法对中国人具有常染色体显性遗传特点的视例膜色素变性家系CY、WN进行基因定位；从定位的染色体区域寻找候选基因，并对候选基因进行患病群体基因突变筛查；研究致病基因与临床表型之间的关系。 方法：提取CY和WN家系成员的DNA；选取分布在HPRP3、RHO、RDS、RP9、RP10、RP1、NRL、ROM1、PRPC8、RP17、FSCN、CRX、PRPF31基因上下约10厘摩(centimorgan，cM)范围内的微卫星标记；利用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)对微卫星位点进行PCR扩增，通过聚丙烯酰胺变性凝胶电泳和银染法确定单倍体型；利用两点法计算微卫星位点与致病基因之间的最大优势对数值(LOD SCORE)；对CY家系进行CRX、PRKCG、PRPF31基因序列分析；对WN家系进行RHO、NRL基因、HPRP3外显子42、PRPC8外显子11以及PRPF31外显子5、6、7、8、11、14以及内含子6序列分析。利用眼底检查和眼底照相以及视野和多焦视网膜电图对CY家系和WN家系患者进行临床表型评估。 结果：在WN家系中，微卫星位点与WN家系致病基因间LOD值均为负值；RHO基因第一外显子上游非编码区中第70个硷基出现A／G套峰，在第5外显子第1185硷基出现A／C套峰；NRL基因、HPRP8外显子42、PRPC3外显子11以及PRPF31外显子5、6、7、8、11、14以及内含子6未发现致病性基因突变。在CY家系中，除19号染色体外，其余微卫星位点与致病基因间LOD值均为负值；D19S571与致病基因两点间LOD值为1.33(θ=0)。CRX第46密码子由TTC(phe)转变为天津医科大学博士研究生毕业论文 TTT(phe);pRKCG基因第24密码子由GCC(ala)转变为GCT(ala);第 189密码子由A户J(asn)转变为AAC(asn);p即F31基因第188密石马子 由GAT(Asp)转变为GAG(Glu)，所有患者内含子6均存在4个硷 基CACA的缺失。结论:WN家系致病基因与目前己知的常染色体显性遗传视网膜色索变性致病 基因和位点可能无关:可能是一种新的致病基因导致了哪家系的临床 表型。CY家系致病基因与位于19ql3.3的微卫星位点存在连锁关系。