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[目的]原癌基因c-Src与肿瘤的发生发展密切相关,本课题组前期发现CXCR4入核与肾癌转移密切相关,其入核后可能与c-Src相互作用促进肿瘤细胞转移,本课题旨在利用基因敲减技术研究慢病毒c-Src shRNA对肾癌细胞的影响及其临床意义,进一步完善CXCL12/CXCR4生物轴信号传导通路的研究,为临床制定肾细胞癌靶向治疗策略提供理论基础。[研究方法]本课题从以下三个方面对研究目的加以验证：1.制备慢病毒介导的c-Src shRNA并利用RT-PCR和Western blot在mRNA、蛋白水平验证基因沉敲减效果；2.体外实验CCK8细胞增殖检测、Transwel、流式细胞技术等验证c-Src基因敲减后肾癌细胞株增殖活性、侵袭迁移、细胞周期、细胞凋亡等指标的变化情况；3.利用免疫组化、组织芯片等技术,检测c-Src基因在肾癌组织中的表达情况,并结合临床指标及预后,探讨C-SRC基因的临床意义。[结果]1、从构建的3条慢病毒c-Src shRNA成功筛选出一条敲减效率达73%的C-SRC shRNA慢病毒,经RT-PCR和Western blot验证能显著抑制A498-EGFP、A498-EGFP-CXCR4细胞中C-SRC基因的mRNA、蛋白表达,同时也抑制了CXCR4基因mRNA、蛋白表达；2、稳转A498-EGFP-SRC shRNA和A498-EGFP-CXCR4-SRC shRNA肾癌细胞株和阴性对照组相比细胞的增殖活性及侵袭迁移能力均下降,细胞周期出现S期阻滞,细胞凋亡差异不明显；3、组织芯片标本中c-src表达量与患者的预后相关,c-src表达不同患者间生存期存在明显差异,c-src表达量高的患者预后更差。[结论]c-Src基因敲减后肾癌细胞的C-SRC基因的mRN A、蛋白表达降低,同时伴有CXCR4基因mRNA、蛋白表达降低,进一步论证了CXCR4入核后可能与c-Src存在相互作用促进肿瘤细胞转移,体外实验表明c-Src基因敲减后肾癌细胞生物学活性降低,且组织芯片中c-Src表达量高的肾癌患者的生存期明显缩短,因此,c-Src基因有望成为肾癌治疗的新靶点。