论文部分内容阅读
目的: 通过肝酶学、肝脏病理、小鼠血液、肝脏和胆汁中胆汁酸的变化以及胆汁酸转运体的表达，探讨甘草和茵陈合用网络调控上游核受体而影响胆汁酸合成、代谢酶和排泌转运体表达，减少肝脏内胆汁酸浓度的防治作用与分子机制。 方法: 1.C57BL/6小鼠随机分组:正常组、模型组、茵陈组（1.13g/kg）、甘草组(1.13g/kg)及茵甘组(1.13g/kg)。每天给药1次，共10天。除正常组外，其余各组于第7天给药1h后再次给ANIT油溶液(100mg/kg)造模。检测TBIL、ALT、AST、ALP和TBA水平，HE染色观察肝脏病理变化。 2.活性炭处理空白基质，乙腈沉淀蛋白法，LC-MS/MS检测小鼠血液、肝脏和胆汁中CA、CDCA、DCA、LCA、TCA、TCDCA和TDCA等胆汁酸成分的含量。 3.RT-PCR检测 CAR、PXR、NTCP、OATP1、BSEP、MRP2、MRP3、MRP4、MDR2、CYP3A11、CYP7A1、CYP8B1、UGT1A1、SULT2A1的mRNA的表达，Western blot检测BSEP、NTCP蛋白的表达。 结果: 1.模型组较正常组小鼠TBIL、ALT、AST、ALP、TBA值升高(P＜0.01);茵陈组、茵陈甘草组较模型组小鼠AST、ALT、ALP、TBA值降低(P＜0.05);甘草组模型组TBA、ALP值降低(P＜0.05)，茵陈、茵甘组TBIL值有下降趋势。模型组较正常组肝脏细胞炎性细胞浸润，胆管上皮细胞紊乱，大量肝细胞空泡坏死;各治疗组肝细胞均有不同程度的好转，其中茵甘组治疗效果最佳。 2.(1)小鼠血浆中，模型组较正常组总胆汁酸明显提高，游离型胆汁酸(CA、CDCA)含量显著升高;结合型胆汁酸均明显增加，其中TCA尤为明显(P＜0.01);与模型组比较，各治疗组胆汁酸均有下降趋势。 (2)小鼠肝脏中，模型组较正常组总胆汁酸显著升高;游离型胆汁酸(CA、CDCA)和结合型胆汁酸(TCA、TCDCA)明显升高(P＜0.01);治疗组较模型组总胆汁酸明显下降(P＜0.01)，TCDCA增加，其他胆汁酸均下降。 (3)小鼠胆汁中，模型组较正常组总胆汁酸明显下降，各胆汁酸含量也明显降低;各治疗组与模型组相比各胆汁酸的含量升高，茵陈与茵甘组最为明显。 3.肝脏中治疗组较模型组核受体(CAR、PXR)、药物代谢酶(CYP3A11、SULT2A1、UGT1A1)、胆盐膜转运蛋白(BSEP、MRP3、MRP4) mRNA表达上调，茵甘合用组最为明显。 结论: 1.茵陈低剂量组(0.945g/kg)可改善肝内胆汁淤积模型小鼠的肝功能、减少肝坏死，对模型小鼠肝损伤具有防治作用。 2.茵陈和甘草以1∶1比例合用，比单味茵陈和甘草对模型小鼠肝损伤防治作用更显著:表现在肝功能改善、肝坏死减少、肝内胆汁酸减少。 3.茵甘合用可通过激活CAR和PXR受体网络调控下游靶基因CYP3A11、SULT2A1、UGT1A1、BSEP、MDR2和MRP2的转录，促进胆汁酸代谢和排泄，从而降低胆汁酸对肝脏造成的损伤。 从分子、组织和整体水平明确茵甘合用对胆汁淤积性肝损伤的防治预作用与分子机制。