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龙眼是我国南方名特优水果之一。生长素是一类重要的植物激素,与果实生长发育密切相关。Aux/IAA和GH3是生长素早期诱导表达的基因。本文以龙眼为材料,在分离Aux//AA、GH3基因全长序列的基础上,分析龙眼果实生长发育过程中Aux/IAA和GH3基因的表达特征,探讨植物生长调节剂NAA(α—naphthaleneacetic acid,α—萘乙酸)、ABA(abscisic acid,脱落酸)和乙烯利对龙眼Aux/IAA和GH3基因表达的影响,试图阐明Aux/IAA、GH3基因与龙眼果实生长发育的关系以及各种外源植物激素处理对它们的调控特性。同时,分析Aux/IAA和GH3基因在龙眼不同部位(根、茎、叶、果皮、果肉)中的表达情况。研究结果如下:
1.采用RT-PCR与RACE-PCR相结合的方法,从龙眼果实中分离出2个Aux/IAA和1个GH3基因的cDNA全长序列,分别命名为DlAux/IAA2、DlAux/IAA9和DlGH3.2。生物信息学分析表明DlAux/IAA2、DlAux/IAA9和DlGH3.2基因分别编码207、251、598个氨基酸,它们与其他物种的Aux/IAA、GH3基因的同源性较高。DlAux/IAA2和DlAux/IAA9推导的氨基酸序列中存在Aux/IAA蛋白的四个保守区域(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ区)。DlGH3.2的氨基酸序列存在GH3蛋白的3个保守序列框(Motif1、Motif2和Motif3),其蛋白与拟南芥Ⅱ类中的GH3蛋白进化关系相近。
2.基因表达分析结果表明,在龙眼果实生长发育过程中,DlAux/IAA2主要参与果皮生长,DlAux/IAA9主要参与果肉生长,而DlGH3.2主要参与果肉生长与成熟。
3.100 mg/L的NAA能够促进果实DlAux/IAA2、DlAux/IAA9和DlGH3.2基因的表达。在果皮快速生长期,NAA处理能够促进DlAux/IAA2和DlGH3.2 mRNA的积累,其中DlGH3.2基因受诱导程度最大。在果肉快速生长期,NAA处理能诱导DlGH3.2在果皮中表达,促进其在果肉中的表达。
4.对龙眼果实进行ABA和乙烯利处理表明,在果实生长发育的前期,ABA和乙烯利处理对DlAux/IAA2和DlAux/IAA9基因的表达影响不大,但抑制了DlGH3.2的表达。在果实生长发育的后期,ABA和乙烯利处理抑制了DlAux/IAA2和DlAux/IAA9基因的表达,但促进了DlGH3.2在果肉中的表达,说明DlGH3.2与果实成熟相关。
5.DlAux/IAA2、DlAux/IAA9和DlGH3.2在龙眼不同器官中有不同的表达。DlAux/IAA2在茎、叶和果皮中表达,在根和果肉中不表达。DlAux/IAA9在茎、叶、皮、果中均有表达。DlGH3.2在幼茎、幼皮、幼果和成熟果肉中有表达。