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KAI1基因是近年来最新发现的一种肿瘤转移抑制基因。1995年由Dong J.T.在Science首先报道后,KAI1抑制肿瘤转移的作用已经在不同转移潜能的肿瘤和癌细胞中得到证实。但是到目前为止,KAI1表达的调控机制、KAI1产物的作用机制仍未阐明。本课题通过应用细胞生物学、分子生物学、免疫生物学、实验动物学等先进技术,从不同层次上深入探讨了KAI1基因及其蛋白的重要生物学功能;通过分析KAI1和肿瘤抑制基因p53的相关性来探讨KAI1抑制肿瘤转移的可能机制,并发现了能够有效激活KAI1/CD82蛋白表达水平的特异性抗癌药物VP16,为临床治愈肿瘤转移提供新思路和理论依据。 首先,我们应用免疫组化技术对临床结肠癌肿瘤标本中的KAI1/CD82蛋白进行检测,结果显示:KAI1/CD82蛋白表达水平同肿瘤患者的肿瘤转移程度密切相关。肿瘤转移程度高的肿瘤组织表达低水平的KAI1/CD82蛋白,而转移程度低的肿瘤组织则表达高水平的KAI1/CD82蛋白。原位杂交技术显示,KAI1 mRNA在肿瘤组织中的表达与肿瘤的恶性程度呈负相关性,在肿瘤灶中检测不到KAI1 mRNA,而在肿瘤灶周围的癌旁组织中KAI1 mRNA表达。以上结果表明,在临床肿瘤标本中,KAI1及其蛋白的表达具有很好的一致性,较好地反映了肿瘤患者的肿瘤转移程度、肿瘤恶性程度,与肿瘤病人临床分期等因素密切相关。 在细胞水平研究上,我们采用流式细胞术和Western Blot首先检测了不同肿瘤细胞中KAI1/CD82蛋白的表达情况。我们观察到,KAI1/CD82蛋白在不同来源的肿瘤细胞均有一定的表达,但表达水平各有差异;经过抗肿瘤药物VP16处理后,肿瘤细胞中KAI1/CD82蛋白表达普遍呈上调趋势,在三种胃癌细胞中,VP16对SGC—7901细胞的KAI1/CD82蛋白表达的诱导作用最为显著。对其它肿瘤细胞系的检测结果发现,纪元硕士学位论文 摘 要 *VP16对具有高转移潜能的肿瘤细胞系的KAll儿D82蛋白表达的诱导作用较强。进一步的研究表明,VP16对KAll/CD82蛋白的这种诱导作用具有时效性,随着作用时间的延长,KAll儿D82蛋白表达升高。此外,我们还检测了其它几种抗肿瘤药物和抗肿瘤活性化合物对 KAll/CD82蛋白表达的诱导作用,发现全反式视黄酸(ATRA)和 VP16联合使用以及单独使用紫杉醇(Taxol)均能够有效诱导 KAll儿D82蛋白的表达。 为了探讨KAll基因的作用机理,我们研究了KAll同肿瘤抑制基因P53的相关性。Western Blot检测结果表明,VP16不仅对肿瘤细胞KAll儿D82蛋白表达具有诱导作用,而且也能够诱导肿瘤细胞P53蛋白的表达,并且VP16对P53的诱导作用也具有时效性。运用激光扫描共聚焦显微镜术观察到,在胃癌细胞 BGC亿n中,KAll儿D82蛋白定位在细胞质膜周围,细胞浆和细胞核中没有表达;VP16作用1汰r后,KAll儿D82蛋白的定位发生了明显的改变,蛋白由细胞质膜转移到核膜周围;VP16作用24hr时,KAll/CD82蛋白已全部由细胞浆转运到细胞核。在此过程中,P”蛋白的定位没有发生改变,仍然分布在细胞核内。由此,我们认为KA儿D82蛋白在VP16作用下转运到细胞核同P53发生作用。同样方法我们也检测观察到KAll/CD82与P53家族成员P6 3的相关性。 应用胃癌细胞裸鼠肝转移模型,我什1证明VP能够显著抑制SGC-79们的实验性肝转移。灌喂了VP16的实验组裸小鼠,SGC刁9们在脾下包膜的移植瘤成瘤率有所下降,移植瘤数目减少,SGC刁9们细胞的肝转移率降低。进一步的 KAll儿D82免疫组化分析中可以观察到VP16能够在裸小鼠体内诱导KAll儿D“蛋白表达。 本文的创新点: 1.首次观察并发现了 KAll/CD82蛋白在经抗癌药物作用后,蛋白定位在肿瘤 细胞内发生的显著变化。 2.立足于对KAll和pn相关性的研究,初步探讨了KAll与p63的相关性。 3.体内外联合验证了抗肿瘤药物VP16对KAll儿D幼蛋白表达的诱导作用,为 VP在临床上抑制肿瘤转移提供有力的实验依据。