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第一部分探讨c-Jun在鼻咽癌组织的表达及其与临床预后关系目的探讨在鼻咽癌组织中c-Jun是否与各临床病理参数有关,c-Jun表达的高低与患者预后的关系以及与PI3K、AKT和mTOR表达的关系。方法1.收集临床患者鼻咽癌组织69例,正常鼻咽黏膜组织21例。2.采用免疫组化方法检测鼻咽癌患者组织和正常黏膜组织中c-Jun表达。结果1.正常鼻咽组织中c-Jun的表达明显低于鼻咽癌组织中的表达,差异具有统计学意义(p<0.05)2.结合临床病例参数分析,在69例鼻咽癌患者组织中,c-Jun与患者的年龄,性别,肿瘤分期(T),淋巴结转移(N)差异和远处转移(M)没有相关性。3.生存分析结果显示,高表达c-Jun的鼻咽癌患者总生存时间较低表达的患者少。结论c-Jun蛋白表达在鼻咽癌组织中比正常鼻咽黏膜表达较高,可能是鼻咽癌的发展过程的一个关键事件,在鼻咽癌组织中c-Jun高表达的患者,总生存时间较短,c-Jun表达与鼻咽癌患者的预后密切相关。第二部分c-Jun通过PI3K/AKT-mTOR通路介导鼻咽癌放射抗拒细胞CNE-2R发生自噬目的探讨c-Jun是否通过PI3K/AKT-mTOR通路调节CNE-2R细胞发生放射抗拒。方法1.生物信息学软件预测PI3K、AKT和mTOR与c-Jun的靶基因关系;2.双荧光素酶报告基因系统验证c-Jun调控PI3K、AKT启动子活性从而激活通路;3.将细胞分成CNE-2R组、c-Jun-shRNA组、LY294002组、RAPA(雷帕霉素)组,干扰通路节点基因,Western blot检测通路相关蛋白c-Jun、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、m-TOR、p-mTOR,自噬相关蛋白P62和LC3 I1 的表达量。结果1.生物信息学软件预测c-Jun与PI3K、AKT基因有互补的结合位点,与mTOR基因无结合位点,PI3K和AKT是c-Jun的预测靶基因。2.成功构建过表达载体质粒GV238-mut-PI3KCG、GV238-mut-AKT1质粒和空载质粒GV238-NC,分别与c-Jun的过表达载体质粒GV230-mut-c-Jun、空载质粒GV230-NC共转染CNE-2R细胞,双荧光酶报告系统显示:与对照组比较,共转染PI3KCG过表达载体质粒与GV230-mut-c-Jun组荧光活性显著增强(P<0.05),共转染GV238-mut-AKT1与GV230-mut-c-Jun组荧光活性亦显著增强(P<0.05)。3.与2R组比较,抑制c-Jun基因,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);与2R组比较,LY294002组抑制 PI3K/AKT 的磷酸化后,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和 p-mTOR/mTOR的表达均下调;与CNE-2R组比较,RAPA组p-mTOR/mTOR表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论c-Jun能直接靶向PI3K、AKT,PI3K和AKT是c-Jun的靶基因。c-Jun通过PI3K/AKT-mTOR通路调节CNE-2R细胞发生自噬。第三部分c-Jun通过PI3K/AKT-mTOR通路对鼻咽癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响目的研究干扰c-Jun和PI3K/AKT-mTOR通路对鼻咽癌抗拒细胞CNE-2R细胞裸鼠移植瘤的放射敏感性的影响方法将裸鼠分为2R0Gy组、2R+10Gy组、c-Jun-shRNA+10Gy组、雷帕霉素+10Gy 抑制组、LY294002+10Gy 组、IGF-1+10Gy 组,第三组接种 c-Jun沉默的CNE-2R细胞,其余各组接种CNE-2R细胞,第一组作为对照组不接受照射和其他处理,其余各组均接受1OGy照射剂量,雷帕霉素+10Gy抑制组、LY294002+10Gy 组、IGF-1+lOGy 组给予腹腔注射、IGF-1、LY294002、雷帕霉素。测量裸鼠移植瘤的体积增长曲线、采用Western blot通路蛋白c-Jun、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、m-TOR、p-mTOR、LC3I1、P62 的表达情况。结果1.与2R组比较,2R+10Gy组的c-Jun、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。2.与 2R+10Gy 组比较,c-Jun-shRNA+l 0Gy 组、IGF-1+lOGy 组的p-PI3K/PI3K、p-AKT/p-AKT、p-mTOR/mTOR 表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002+1 OGy 组、RAPA+1 OGy 组 p-PI3K/PI3K p-AKT AKT、p-mTOR/mTOR表达减少。结论放射后,c-Jun通过PI3K/AKT-mTOR通路对鼻咽癌CNE-2R细胞裸鼠移植瘤发生自噬。