在炎症、组织损伤与修复，及肿瘤转移等多种生理、病理过程中，蛋白酶对细胞外基质的降解都起着非常重要的作用。尿激酶型纤溶酶原激活剂(Urokinase-Type Plasminogen Activator，uPA)是—种非常重要的丝氨酸蛋白酶。uPA不仅本身是一种蛋白酶，更重要的是，uPA能够激活一系列蛋白酶，降解细胞外基质。包括成纤维细胞在内的多种细胞能够合成、分泌uPA。未活化的uPA是一种单链蛋白质(scuPA)。scuPA从细胞分泌出来后，经与细胞膜表面的uPA受体(uPAR)结合并被活化，形成双链蛋白质。活化的uPA进而激活纤溶酶原(plasminogen)，使之活化为纤溶酶(plasmin)。纤溶酶是一种胰蛋白酶类的蛋白酶，它不仅能够降解纤维蛋白等多种细胞外基质，而且能够激活金属蛋白酶等多种其它蛋白酶类。由此可见，uPA在启动和促进整个细胞外基质的降解过程中起着非常关键的作用。 牙周病主要为炎症类疾病，是牙周厌氧菌感染引起牙周组织的炎症、组织损伤，直至牙槽骨吸收。近年来，uPA-纤溶酶系统在牙周病的发生、发展中的作用日益受到重视。不少学者的研究证实，uPA及纤溶酶在牙周病引起的组织损伤中起着重要的作用。革兰氏阴性菌细胞壁所含的内毒素脂多糖——LPS(lipopolysaccharide)，是一种公认的重要的牙周病的致病因子。LPS能够刺激牙周及牙龈成纤维细胞等表达IL-1β、TNF-α、PGE 第。刀由人会傅十甘伍公式 等多种炎症因子，参与牙周组织的损伤、破坏过程。近年来的研究发现， LPS能够诱导牙龈成纤维细胞表达uPA。Ogura及Naomi等学者的研究证 实，经LPS刺激后，牙龈成纤维细胞中 uPA的蛋白质和 mRNA的量明显 增强，且牙龈成纤雏细胞培养液中UPA的活性也明显增强。但＊＊S诱导 牙龈成纤维细胞表达lPA的机理尚不清楚。 本研究的目的在于探讨LPS诱导人牙龈成纤维细胞表达lPA的信号 转导机理，为加深对牙周病发病机理的认识，为开辟治疗牙周病的新途径 提供实验与理论依扼。 首先，本研究观察了 LPS对人牙龈成纤纶细胞表达 uPA的诱导作 用。研究证实，经LPS刺激8小时后，牙龈成纤维细胞lPA的表达量明 显增加，这一诱导作用少持续至少 24 J＼时。同时，Western blotting实验 证实，LPS能够明显地增强牙龈成纤维细胞内 p38 MAPK的磷酸化，即 LPS能够促进p38 MAPK的活性。p38 MAPK是一种重要的信号转导蛋白 激酶，在炎症、细胞增殖、分化等过程中起着非常重要的调控作用。同 时，有研究发现，p38 MAPK参与多种蛋白酶的表达调控。LPS能够诱导 丁龈成纤维细胞表达二PA，并能促进…8＊＊PK的活性：而…SMAPK 信号转导途径参与蛋白酶的表达调控。由此，我们认为，LPS对uPA表 达的诱导作用很可能是通过p38 MAPK信号转导途径头现的。为证实这一 假设，本研究应用 p38 MAPK特异性抑制剂SB203580抑制牙龈成纤维细 胞内…8＊＊＊K的活性，之后，观察＊陀对”A表达的诱导作用。研究 发现，经SB203580处理后，L陀对牙龈成纤雏细胞表达”A的诱导作用 受到明显的抑制。这一结果证实，p38 MAPK信号转导途径对LPS诱导牙 龈成纤维细胞表达llPA是必须的。 一5一 第。＊医上q傅士嗲位伦式 细胞内蛋白质的表达量取诀于mRNA的量，而mANA的量取抉于两 个因素，即基因的转录水平和 mRNA的稳定性。LPS诱导牙龈成纤维细 胞表达uPA可以通过增强uPA基因的转录或增强 uPA mRNA的稳定性， 或两者兼而有之。为明确LPS的作用机理，本研究将lPA基因的调控序 列——启动子克隆入报告基因载体，并转染牙龈成纤维细胞。经LPS刺 激后，观察报告基因的表达c结果发现，＊PS对UPA基因的启动子无明 显作用，说明LPS诱导牙龈成纤维细胞表达UPA并3「是通过增强lPA基 因的转录实现的。本研究进一步观察了 LPS和 p38 MAPK对 uPA mRNA 不定性白影回。Northern blotting实验发现，LPS明显地延长 uPA InRNA 的半衰期。但经SB203580处理后，LPS对uPA mNNA的作用受到抑制。 这说明：①LPS通过增强 uPA mRNA的稳定性而增强 uPA的表达；② LPS是通过 p38 MAPK信呈转导途径来增强 uPA m删A的稳定性的。 mRNA的稳定性通常是通过mRNA 3’－端或5’－端非翻译区内的顺式原 件来调控的。常见的调控mRNA稳定性的顺式原件是ARE序列。uPA的 mRNA有较长的 3’－端非翻译区，包含 ARE序列。为证实 uPA mRNA的 3’－端非翻译区是否?