【摘 要】
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枣（Ziziphus jujuba Mill.）为鼠李科（Rhamnaceae）枣属（Ziziphus.）的木本植物,是我国最古老而又独有的果树种质资源,已有8000多年的栽培历史。西山焦枣是安徽省传统名优特产之一,富含多种营养成分及矿质元素,其Vc含量可达593.8mg/100g,营养价值和经济价值极高。西山焦枣在栽培方面也曾遭遇过枣疯病的侵害,30多年前,就有专家提出用铜钱树作为抗枣疯病的砧木
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枣（Ziziphus jujuba Mill.）为鼠李科（Rhamnaceae）枣属（Ziziphus.）的木本植物,是我国最古老而又独有的果树种质资源,已有8000多年的栽培历史。西山焦枣是安徽省传统名优特产之一,富含多种营养成分及矿质元素,其Vc含量可达593.8mg/100g,营养价值和经济价值极高。西山焦枣在栽培方面也曾遭遇过枣疯病的侵害,30多年前,就有专家提出用铜钱树作为抗枣疯病的砧木,多年来,事实说明铜钱树作为砧木的确可以抗枣疯病,到目前为止,这种砧穗组合在长江流域的枣树栽培中被广泛沿用,在很大程度上有防治枣疯病的作用,同时嫁接之后树的长势较好,果实品质也有一定程度的提高。课题组进一步对不同砧穗组合的三年生枣树嫁接苗叶片进行代谢组学和转录组学综合分析,通过数据整合发现,在不同砧穗组合的枣叶片中,激素代谢发生显著变化,推测铜钱树砧主要是通过生长素代谢途径代谢途径的介导,参与对枣疯病的抗性反应过程。为此,本论文对两个IAAs转录因子进行基因克隆和功能分析,验证IAAs基因对铜钱树砧木抗枣疯病的作用机理。本论文有望阐明生长素调控铜钱树砧木抗枣疯病的机制,为选育和发掘抗枣疯病枣树品种或抗性砧木,用于防治枣疯病以及保障枣产业的可持续发展,具有重要的理论研究意义和实际应用价值。本试验以不同砧穗组合的三年生枣树嫁接苗叶片为试材,根据转录组和代谢组的整合分析结果,克隆2个IAAs基因ZjAUX28和ZjSAUR32,并进行相关生物信息学分析。采用实时定量PCR技术,对ZjAUX28和ZjSAUR32进行表达模式分析。构建超表达载体pCXSN-FLAG-AUX28和pCXSN-FLAG-SAUR32,并成功转化Col拟南芥,并鉴定得到若干转基因植株;同时构建GFP融合蛋白pCXSN-GFP-AUX28和pCXSN-GFP-SAUR32,并且成功对基因进行亚细胞定位。本试验取得以下主要结果:1.以2013年6月28日的枣本砧对照组的枣叶片为试材,克隆得到两个IAAs基因ZjAUX28和ZjSAUR32;测序结果显示,ZjAUX28的ORF框由723个碱基组成,编码240个氨基酸,ZjSAUR32的ORF框由411个碱基组成,编码136个氨基酸。2.IAAs基因进行序列分析及进化树分析结果表明,ZjAUX28的基因与小立碗藓Pp AUX28同源性最高,ZjSAUR32与黄麻Cc SAUR同源性最高。3.对ZjAUX28和ZjSAUR32进行了实时定量PCR分析,结果表明,供试基因ZjSAUR32和ZjAUX28表达量峰值均在2013年6月28日铜钱树接种组中,而枣本砧接种后无明显的响应表达。4.成功构建超表达载体pCXSN-FLAG-AUX28和pCXSN-FLAG-SAUR32,转化5.Col拟南芥,分别以ZjAUX28和ZjSAUR32基因和潮霉素基因序列设计引物进行PCR扩增,鉴定得到转基因阳性拟南芥植株11个。6.成功构建GFP融合蛋白表达载体pCXSN-GFP-AUX28和pCXSN-GFP-SAUR32,农杆菌浸染法转化洋葱表皮细胞,进行亚细胞定位实验,发现ZjAUX28和ZjSAUR32均定位于细胞核中。
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