【摘 要】
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单纯疱疹病毒(HSV)是一种具有较强传染性的病原体.该实验的研究重点是分析差异基因所编码蛋白在细胞内的功能意义,通过HSV-I型病毒刺激KMB-17细胞后,进行差异显示分析,克隆得
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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单纯疱疹病毒(HSV)是一种具有较强传染性的病原体.该实验的研究重点是分析差异基因所编码蛋白在细胞内的功能意义,通过HSV-I型病毒刺激KMB-17细胞后,进行差异显示分析,克隆得到了差异基因HSP347,经GenBank检索为一未知功能编码基因,全长1172bp,CDS全长为924bp,研究人员将该基因克隆到谷胱甘肽转移酶融合表达载体(pGEX-5x-1)中,构建了pGEX-HSP347表达质粒,在大肠杆菌BL21中获得了较高的表达,并采用GlutathioneSepharose4B进行亲和纯化后获得较高纯度的目的蛋白,用该蛋白免疫小鼠后制备的特异抗血清进行蛋白质功能初步分析,蛋白印迹实验和病毒刺激KMB-17细胞免疫沉淀实验(IP)均表现出抗体的特异性,显示研究人员所表达的HSP347N蛋白具有与天然蛋白相同的构象.依靠Internet及生物信息技术进行数据的分析整理,对实验结果和结论进行论证及预测,研究人员可以初步推测差异新基因HSP347翻译蛋白是与核内蛋白相互作用的一类调节蛋白,可能与某些基因的转录调节相关.
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