论文部分内容阅读
目的:脑出血在神经科是常见疾病，死亡率和致残率均较高，严重威胁着全人类的健康。血肿周围脑组织出现血红蛋白分解、炎性细胞反应、细胞凋亡等病理反应是导致脑出血后继发性损伤的促发因素，其中细胞凋亡是导致脑出血后神经元功能障碍的重要因素。Omi/HtrA2，属于线粒体丝氨酸蛋白酶，是近年来研究的热点，有促进细胞凋亡的作用；Apo-J（载脂蛋白-J）是一种几乎存在于所有体液和细胞表面的多功能糖蛋白，具有参与细胞凋亡、调控细胞间相互作用、抑制补体系统激活等重要的生理功能。本实验通过建立大鼠脑出血模型，运用TUNEL染色观察神经细胞凋亡，免疫组化法检测脑出血后血肿周围脑组织Apo-J及Omi/HtrA2蛋白的表达情况，RT-PCR法检测Apo-JmRNA及Omi/HtrA2mRNA的表达水平，分析它们之间的关系，探讨Apo-J及Omi/HtrA2在脑出血中的作用及其相关性，为出血性脑卒中寻找新的治疗策略。方法:1.自体血注入大鼠脑尾状核制作脑出血模型。2.SD大鼠150只，随机分成空白对照组（NC组,10只）、假手术组（SO组,70只）、脑出血（ICH组,70只），后两组随机分为造模后6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d组，每亚组10只。NC组及以上各亚组再各自随机分为RT-PCR组（5只）、免疫组化及TUNEL组（5只）。3.造模后ICH组在各相应时点进行神经功能障碍评分，造模后6h、12h、1d、2d、3d、5d和7d7个时间点处死动物，干湿重法测定不同时点血肿周围脑组织含水量。4.免疫组化法检测各时点血肿灶周围及SO组、NC组与之对应的相同区域Apo-J、Omi/HtrA2的表达，并用TUNEL法检测前述免疫组化检测区的细胞凋亡情况。RT-PCR检测Apo-JmRNA及Omi/HtrA2mRNA的表达水平。5.全部资料用SPSS11.5统计软件进行数据统计分析，数据用“平均值士标准差”表示，p＜0.05为差异存在,有统计学意义，p>0.05为差异不存在，无统计学意义。结果：1.NC组、SO组在各时间点未发生神经功能障碍；ICH组神经功能障碍评分在各时间点低于NC组与SO组(p＜0.05)，在3d时评分最低。2.ICH组在各观察时间点的脑含水量与NC组及SO组比较, p＜0.05,有统计学意义;其他各时间点脑含水量明显低于3d亚组,p＜0.05,有统计学意义。3.Apo-J及Omi/HtrA2在ICH组血肿灶周围的表达增加，以3d亚组最高(p＜0.05)，各亚组均显著高于相同时点的SO组、NC组(p＜0.05)。TUNEL结果显示了与Apo-J及Omi/HtrA2蛋白表达平行的细胞凋亡情况。4.NC组及SO组大鼠脑组织Omi/HtrA2mRNA可见低水平表达;ICH组各观察时间点中Omi/HtrA2mRNA以3d亚组最高(P<0.05),各亚组均显著高于相同时点的SO组、NC组(p＜0.05)。5.NC组及SO组大鼠脑组织Apo-JmRNA可见低水平表达;ICH组各时间点中Apo-JmRNA以3d亚组最高(p＜0.05),各亚组均显著高于相同时点的SO组、NC组(p＜0.05)。6.ICH各组神经功能障碍评分与相应各组血肿周围脑组织含水量呈明显负相关(r=-0.760, p＜0.001)。7.ICH组TUNEL与脑含水量之间呈正相关关系(r=0.858, p＜0.001)。8.ICH组TUNEL与Omi/HtrA2及Apo-J蛋白的表达值呈正相关。9.ICH组手术侧的Apo-JmRNA表达值与Omi/HtrA2mRNA表达值之间呈正相关关系(r=0.883, p＜0.001)。结论:1.细胞凋亡机制参与了脑出血后继发性损伤。2.Omi/HtrA2基因高表达是脑出血后细胞凋亡的又一个重要因素。3.大鼠脑出血后Apo-JmRNA表达增加，且与Omi/HtrA2mRNA的表达呈正相关，推测Apo-J抑制Omi/HtrA2介导的细胞凋亡是其神经元保护作用的机制之一。