NADH/NAD+，作为生物体内300多种脱氢酶反应必不可少的辅酶对，在食品加工、环境分析以及临床诊断等领域有着广泛的应用。除此之外，NADH还因为能够改善老年痴呆症、帕金森症和抑郁症等疾病患者的身体机能而具有重要的药用价值。因此，制备相应的传感器来测定生命系统中NADH的水平是至关重要的。到目前为止，已经报道出了许多检测NADH的传感器，大多是利用具有氧化还原性质的电子转移媒介体来催化NADH的氧化这一原理来构建电化学生物传感器。本论文的研究工作主要是运用不同的方法对还原型辅酶（NADH）进行有效的定量分析，并且构建脱氢酶型生物传感器用于乙醇的选择性检测。具体的研究内容包括：　　（1）采用多巴胺（DA）作为还原剂，温和且有效地合成了还原程度不太高的还原氧化石墨烯(rGO),再以rGO为支撑材料，采用非共价修饰法-π-π堆积作用将1-羟基芘（1-OHP）固定在石墨烯纳米片修饰电极上。利用1-OHP和rGO之间的协同作用，有效降低了NADH氧化的过电位，实现了NADH在较低电位（-0.06V vs. SCE）下的检测，线性范围为100-1500μ?和1500-3800?μ?，检出限为14.8μ?。　　（2)基于NADH和HRP在O2存在下的相互作用，提出了一种新的策略来构建NADH传感器和相应的在超低电位下（-0.4 V）工作的乙醇生物传感器。具体步骤为，通过装载有金纳米颗粒的聚多巴胺球（AuNPs/PDAS）将辣根过氧化物酶（HRP）固定在玻碳电极上。HRP/AuNPs/PDAS修饰电极显示对NADH的良好反应，这可以从在CV曲线上加入NADH时阴极峰电流的显著增加看出。电流测量在-0.4 V下进行，在0-10.0μM和10.0-45.0μM的范围内获得NADH的线性响应，检出限（LOD）为0.2μM。此外，在乙醇脱氢酶（ADH）和NAD+的共同存在下，在HRP/AuNPs/PDAS修饰的电极上测定乙醇，检测线性范围为0-18.0μM，LOD低至0.3μM。　　（3）通过HAuCl4将还原态的TMB催化氧化显色，再利用NADH的还原性使氧化态的TMB（TMB(ox)）褪色，根据不同浓度的NADH使TMB(ox)褪色的程度不同来定量分析NADH。本实验不需要进行任何合成，操作简单，现象可视，直观明显。检测线性范围为10-100μM，检出限低至2.4μM。