论文部分内容阅读
绝经后骨质疏松症是因女性绝经后卵巢功能衰退,体内雌激素水平急剧下降,导致破骨细胞活动度增加、骨转化率升高而表现出全身骨量减少、骨密度降低、骨脆性增加的一种骨代谢疾病。在临床治疗中,常使用雌二醇等来治疗绝经后骨质疏松症以及生殖系统疾病等,雌激素能够直接提高体内雌激素水平,刺激成骨细胞活性,纠正骨代谢异常,缓解生殖系统萎缩。但长期使用化学合成类雌激素,易引发宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌以及心血管血栓等,具有一定风险性。因此使用植物雌激素治疗骨质疏松症受到青睐,但也有研究表明单纯使用植物雌激素的疗效并不理想。本研究选用了两种植物雌激素葛根素、丹参酮ⅡA,分别联合VitD3对维甲酸诱导的骨质疏松大鼠进行给药。一方面,观察葛根素、丹参酮ⅡA是否能发挥雌激素样作用,来阻止骨丢失,促进成骨,减弱破骨效应。另一方面,观察葛根素、丹参酮ⅡA联合VitD3的给药疗效是否优于其单独给药。实验动物分为7组,分别为模型组（Model组）,对照组（Normal组）,葛根素给药组（PUE组）,丹参酮ⅡA给药组（TSⅡA）,丹参酮联合VitD3组（TSⅡA+VitD3）,葛根素联合VitD3组（PUE+VitD3）和雌二醇组（E2）。给药70d后从血液生化指标（E2、OPG、RANKL、ALP、血钙、血磷）,体重,生殖系统脏器指数,骨组织形态计量学,成骨、破骨细胞数量,OPG、RANKL、RUNX2蛋白及mRNA表达等方面,比较二者联合给药的效果是否优于其单独给药。同时,通过生殖系统形态计量学方法观察葛根素、丹参酮ⅡA对骨质疏松大鼠子宫、阴道组织的修复作用,本研究将为增加骨密度保健食品和药物研发,以及绝经后骨质疏松患者的生殖系统修复与治疗提供理论依据。主要结果如下:（1）3月龄SD大鼠维甲酸80mg/（kg·d）灌胃给药21d可成功构建大鼠骨质疏松疾病模型。模型组较对照组相比体重、脏器指数均显著降低,血清ALP显著升高,骨微结构破坏,骨小梁变细、断裂、骨小梁间距增大,骨髓腔中脂肪细胞增多,呈现骨质疏松病理变化。（2）各组动物血清OPG、RANKL、ALP、E2的ELISA检测分析发现,丹参酮ⅡA联合维生素D3给药可显著升高骨质疏松大鼠血清OPG、E2含量,显著降低血清RANKL、ALP含量,显著提升OPG/RANKL比值,其效果优于丹参酮组、葛根素组、及葛根素联合维生素D3给药组。（3）股骨干骺端骨组织形态计量分析发现,模型组骨小梁变薄、间距较大、骨小梁断裂,骨小梁面积缩小,葛根素、丹参酮ⅡA联合维生素D3能够有效改善骨质疏松大鼠骨组织结构,增加骨质疏松大鼠骨小梁厚度、骨小梁面积百分比,降低骨小梁间距,且联合使用Vit D3效果要优于其单独给药,从两种药物对骨组织结构的修复作用来看TSⅡA+VitD3效果优于PUE+VitD3。（4）骨组织成骨细胞、破骨细胞酶组化染色和计数,骨组织OPG、RUNX2、RANKL免疫组织化学染色及光密度分析结果显示,葛根素、葛根素联合维生素D3、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡA联合维生素D3均对骨组织中成骨细胞数量及OPG、RUNX2表达具有促进作用,对骨组织破骨细胞数量和RANKL表达具有抑制作用。（5）骨组织OPGmRNA、RANKLmRNA、VDRmRNA检测结果显示,丹参酮ⅡA联合VitD3给药对OPGmRNA、VDRm RNA的上调作用以及对RANKLm RNA的抑制作用优于其它给药组,表明丹参酮ⅡA联合VitD3给药组对骨组织的成骨作用,及成骨基因表达上调方面效果优于葛根素、葛根素联合VitD3组。（6）子宫和阴道组织病理学和形态计量学分析结果显示,葛根素与丹参酮ⅡA均能显著增加骨质疏松大鼠生殖器官湿重,增加血清E2,改善骨质疏松大鼠子宫、阴道的病理变化,二者均能发挥雌激素样作用,对骨质疏松大鼠生殖系统损伤起到修复作用。