欧拉型藏羊消化系统发育和肌肉H-FABP基因表达规律的研究

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为了探讨藏羊消化系统发育和肌肉H-FABP基因表达规律,本研究选择分布于青藏高原东部黄河第一大弯处甘肃省玛曲县的欧拉型藏羊为研究对象,将60只公羔分别于0、2、7、14、21、28、42、56、72、84、98和112日龄屠宰,采用大体解剖技术、酶活性分析法、生长曲线拟合方程及real time PCR技术等研究了0~112d(哺乳期)欧拉型藏羊羔羊消化道的发育规律及其瘤胃内主要消化酶活性的发育性变化,羔羊不同生理时期皱胃、小肠内容物及黏膜消化酶、胰腺消化酶活性的变化;羔羊消化器官的生长曲线拟合;H-FABP基因在欧拉羊心脏组织和肌肉组织中的发育性表达,以及与IMF含量的相关性,结果如下:1欧拉型藏羊消化器官的生长发育及瘤胃内主要消化酶活性的变化测定了各日龄欧拉型藏羊羔羊体重,肝脏、胰腺重量,复胃及内容物重量,复胃净重,小肠、大肠、盲肠净重、相对重,胃容积及肠长度;测定了瘤胃内容物微生物酶活及各胃室pH。结果表明:(1)欧拉型藏羊羔羊在0~112d的消化道发育迅速,消化道各部位增重明显,容积和长度等指标都显著增加,尤其瘤胃和小肠的增重明显高于其他部位的增重速度;(2)欧拉型藏羊羔羊跟群放牧食入部分牧草可明显刺激瘤胃的发育,70d时,瘤胃pH已接近成年羊水平,并维持在相对恒定的范围内,皱胃pH维持较低水平,呈强酸性;(3)瘤胃微生物酶活性随着日龄增长而提高,其中淀粉酶和木聚糖酶活性增加显著,纤维素酶和果胶酶增加较缓慢,蛋白酶缓慢降低,且纤维素酶活性维持在较低水平,112d时羔羊的消化道及其功能已接近成年水平;(4)在欧拉型藏羊生产实践中,70d断奶较适宜,56d是可接受的最早断奶日龄。2欧拉型藏羊羔羊消化器官发育的生长曲线拟合分析采用CurveExpert1.3和SPSS11.5分析软件对不同日龄欧拉型藏羊羔羊各消化器官进行四种曲线拟合。结果表明:欧拉型藏羊早期生长过程中体重、体尺及消化器官的变化符合生物自然生长规律,Richards曲线模型是拟合欧拉型藏羊羔羊体重和胸围早期生长的最优模型,R~2分别为0.9900858和0.9956355;Exponential Association是拟合欧拉型藏羊羔羊体高和体长早期生长过程的最优模型,R~2分别为0.9958635和0.9989817;Gompertz Relation模型是拟合羔羊瘤胃、网胃和瓣胃重量生长曲线的最优模型,R~2分别为0.9969633、0.9990474和0.9991166;4th Degree Polynomial Fit模型是皱胃、十二指肠、回肠和盲肠以及肝脏和胰脏重量变化拟合的最优模型,R~2分别为0.9982634、0.9995719、0.9993717、0.9993425、0.9982556和0.9987633;Logistic模型是空肠和直肠重量变化拟合的最优模型,R~2分别为0.9993071和0.9995853;4th Degree Polynomial Fit模型是羔羊各胃室容积变化拟合的最优模型,瘤胃、网胃、瓣胃和皱胃的R~2分别为0.9998086、0.9960602、0.9979316和0.9843221;4th Degree Polynomial Fit模型是拟合羔羊肠道长度生长曲线的最优模型,十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠的R~2分别为0.9989660、0.9986684、0.9962898、0.9986193、0.9972662和0.9982142。3欧拉型藏羊羔羊消化道pH及主要消化酶发育规律取羔羊皱胃粘膜、内容物,小肠粘膜、内容物等以及胰腺,测定其pH和消化酶活性。结果表明:(1)随着欧拉型藏羊羔羊日龄增大,皱胃(内容物、不同部位黏膜)pH呈现下降趋势,均呈强酸性。初生羔羊皱胃(内容物、不同部位黏膜)pH均显著高于其他日龄(P<0.05)。羔羊到42d后,皱胃内pH变化基本不大(P>0.05);(2)初生羔羊皱胃凝乳酶比活性较高,随着羔羊日龄的增长,酶比活性在迅速降低,在羔羊42d前,皱胃凝乳酶比活性的变化幅度很大,42d后变化幅度较小。皱胃内容物蛋白水解酶比活性相对最低,羔羊皱胃幽门腺区蛋白水解酶比活性低于胃底中部和皱胃贲门腺区(P<0.05),胃底中部和皱胃贲门腺区蛋白水解酶比活性无显著差异(P>0.05)。42d后皱胃胃底中部黏膜蛋白水解酶比活性基本稳定。初生羔羊有较高的胃前脂酶比活性;(3)羔羊胰腺、小肠pH随日龄变化不大:胰腺均大于7,呈弱碱性。回肠pH高于空肠(P<0. 05),空肠的pH高于十二指肠(P<0. 05),十二指肠最低。羔羊十二指肠段pH呈弱酸性,空肠和回肠pH呈弱碱性;(4)羔羊出生后小肠内就存在较高的胰蛋白酶和糜蛋白酶活性。空肠胰蛋白酶和糜蛋白酶活性最高,回肠次之,十二指肠最低。随着羔羊日龄的增长,小肠胰蛋白酶和糜蛋白酶活性呈现为增加趋势,70d后羔羊小肠内容物胰蛋白酶和糜蛋白酶活性基本保持在相对稳定状态;(5)羔羊小肠不同部位淀粉酶活性不同,空肠段淀粉酶活性显著高于十二指肠和回肠(P<0.05)。随着羔羊日龄的增长,小肠淀粉酶活性持续增加,到84d后小肠各段淀粉酶活性基本处于稳定状态。初生羔羊小肠乳糖酶活性较高,小肠不同部位乳糖酶活性不同,空肠段内容物和粘膜乳糖酶活性最高,十二指肠次之,回肠最低;羔羊小肠粘膜乳糖酶活性显著高于其内容物乳糖酶活性;随着羔羊日龄的增长,小肠乳糖酶活性降低,70d后酶活恒定;(6)不同日龄羔羊小肠不同部位内容物和粘膜脂肪酶活性不同,空肠段脂肪酶活性最高,回肠次之,十二指肠最低,且羔羊小肠内容物脂肪酶活性显著高于其粘膜脂肪酶活性;随着羔羊日龄的增长,小肠脂肪酶活性逐渐升高,到84d后小肠各段粘膜脂肪酶活性基本呈稳定趋势;(7)羔羊胰脏主要消化酶活性随日龄变化不大。4羔羊肌肉H-FABP基因表达的发育性变化及其对肌内脂肪含量的影响取2、21、56、84和112日龄欧拉型藏羊公羔(各日龄5只)背最长肌、股二头肌和心脏样品,测定肌内脂肪含量和肌肉H-FABP mRNA表达量。结果表明:(1)随着羔羊日龄的增长,欧拉型臧羊肌肉IMF含量持续上升,不同部位组织IMF含量存在差异;(2)随着羔羊日龄的增长,其肌肉H-FABP mRNA的表达不同,并存在组织差异性,2~21d降低,21d后持续上升,各日龄间差异显著;H-FABP mRNA表达量在21~112d羔羊生长期间与IMF含量呈正相关,表明H-FABP基因在生长发育早期就影响IMF含量,可以作为影响欧拉型臧羊IMF含量的候选基因之一。
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