论文部分内容阅读
[目的]通过恒温扩增微流控芯片荧光检测核酸技术(Fluorescent Detection Nucleic Acid Analysy Technique of Isothermal Amplification Microfluidic Chip)快速筛查关节结核菌种,研究其临床应用的可行性、简便性、快捷性、精准性等介绍和评估。[方法]1.选取2016年4月-2017年10月昆明医科大学第一附属医院本院、呈贡分院骨科住院部收治的可疑关节结核感染19例患者:关节结核的病史、临床表现、影像学检查中具备2-3项选入试验对象,而仅具有1项或没有以上资料、已确诊关节结核者均排除试验对象。其中男性8例,女性11例,年龄平均26.7岁;膝11例,髋9例。2.采集疑似关节结核感染患者的关节穿刺液、关节置换术中组织悬浮液、感染创口分泌混合液的两组相同标本,均采集6ml。一组标本立即送至我院PCR室行恒温扩增微流控芯片荧光检测核酸技术(简称恒温扩增微流控芯片技术,IAMC)检测(实验组),另一组标本立即送至昆明市传染病院细菌培养室行罗氏培育法检测(对照组)。3.记录IAMC法和罗氏培育法检测时间,统计分析两组、阴性数。用χ2检验,比较数据,获得结果。[结果]1.IAMC法(实验组)培养结果为:13例阳性,6例阴性;罗氏培育法(对照组)培养结果为:7例阳性,12例阴性。其中包括实验组检测出非单纯结核感染的标本3例:关节金葡菌感染1例,关节大肠埃希菌感染1例,关节结核合并金葡菌感染1例;此3例标本对照组检测结果均为阴性。2.罗氏培养法耗时约4-8w,IAMC法耗时约170.5min。3.两种结核病检测方法检测阳性率差异有统计学意义(χ2=5.115,p<0.05),结果一致(Kappa 值=0.424)。[结论]1.恒温扩增微流控芯片荧光检测核酸技术可直接检测扩增标本的结核分枝杆菌复合群DNA序列,快速进行菌种筛查,达到关节结核病感染快速筛查的目的;2.恒温扩增微流控芯片荧光检测核酸技术检测关节结核感染菌的灵敏度比罗氏培育法的灵敏度较高,可弥补罗氏培育法检测高假阴性缺点;具有同时多种细菌检测的能力。3.具备无需变性、退火等反复的热变性,操作简便,技术要求降低等特点的恒温扩增技术,融合微流控芯片的封闭一步式处理、分析检测,阴性、阳性对照设计降低交叉污染风险,减少误差的优势,同时控制仪器、试剂成本下降,便于关节结核病感染的筛查检测,甚至可以普及基层医疗单位。4.此次研究中,恒温扩增微流控芯片荧光检测核酸技术对于其他细菌的检测比罗氏培养法相比有优势,显示了其作为关节混合性感染快速筛查的良好应用前景。